Construcción e inserción del cassette AtBBM::pk7WG2 mediante agroinfiltración en células de hojas de Theobroma cacao L

Abstract

El cacao (Theobroma cacao) es un cultivo de gran importancia a nivel nacional y global; sin embargo, presenta ciertas limitaciones en cuanto al desarrollo de metodologías de propagación que aseguren el mantenimiento de las características deseables seleccionadas; debido a ello se hace necesario explorar nuevas herramientas o técnicas que permitan sobrellevar tales inconvenientes. En ese sentido, el objetivo del presente trabajo fue construir e insertar el cassette AtBBM::pk7WG2 mediante agroinfiltración en células de hojas de T. cacao L. Para este fin, se extrajo ARN de Arabidopsis thaliana a partir del cual se sintetizó ADNc conteniendo el factor de expresión AtBBM, que se amplificó e insertó en un cassette de expresión utilizando el sistema de clonación Gateway con el vector de entrada pENTR y el vector destino pK7WG2. Una vez obtenido el cassette de expresión con el gen de interés AtBBM, este fue insertado por electroporación en células de Agrobacterium tumefaciens, las cuales fueron usadas posteriormente para transformar hojas de T. cacao en la etapa C mediante agroinfiltración al vacío. Los resultados obtenidos en cada uno de los pasos fueron validados de manera exitosa a través de cuantificación de productos extraídos y electroforesis de confirmación de la presencia del gen de interés y permitirán aportar al desarrollo de programas de mejoramiento orientados en la transformación genética de cacao.