Purificación y caracterización de la proteína Vif recombinante y el anticuerpo monoclonal 3E12, específico para esta proteína

Abstract

La proteína Vif es esencial para la replicación in vivo del VIH y tiene como blanco a la proteína celular Apobec3G. En este trabajo hemos estudiado la cinética de expresión de vif en E.coli, hemos purificado la proteína y estudiado sus condiciones de renaturalización. Además se ha purificado un anticuerpo monoclonal (AcM) (3E12) contra la misma, al cual se le ha determinado su especificidad, su Kd, su clase, su capacidad para reconocer el antígeno en solución y se ha estudiado su epitopo. En cuanto a la cinética se estableció que en las condiciones especificadas se lograba hasta un 44,9% de expresión y en la purificación se pudo obtener un preparado con más de un 90% de pureza con respecto a contaminantes de E.coli. El AcM purificado (98% de pureza) fue específico para su antígeno y se obtuvo una Kd en tiempo real de 2.24nM. La subclase del AcM fue IgG2a, aunque se encontró una actividad residual con IgG1 que debe ser dilucidada. Además este AcM fue capaz de reconocer el antígeno en solución (Vif-CIGB) y se excluyeron como posibles epítopos de reconocimiento la región N-Terminal desde el aa 34 hasta el aa 47 y en la región C-Terminal desde el aa 176 hasta el aa 192.