Influencia del proceso tafonómico en la obtención de ADN a partir de tejido óseo humano proveniente de fosas clandestinas utilizando tres metodologías de extracción molecular

Abstract

Los estudios genéticos y moleculares en restos óseos antiguos de interés forense son cada vez más frecuentes y se basan en técnicas de extracción del ADN, las cuales emplean metodologías complejas que deben enfrentarse a muestras poco conservadas con serios problemas como la degradación, la limitada cantidad de ADN y la presencia de inhibidores. El presente trabajo se desarrolló con la finalidad de comparar tres metodologías de extracción de ADN y evaluar laeficiencia en la obtención de ADN nuclear útil para casos forenses, mediante la técnica de PCR. Se evaluó la cantidad de ADN, la presencia de inhibidores y la procedencia de las muestras con cada metodología de extracción analizada: el método orgánico, el de desmineralización con las recomendaciones de la ICMP y el que emplea el Kit comercial QIAamp DNA Investigator de QIAgen®, los mismos que requieren procedimientos distintos para la digestión y descalcificación de la muestra ósea. Se analizaron 119 muestras recuperadas de lugares de entierro clandestinos en diferentes contextos tafonómicos y expuestas a mecanismos deteriorantes: impacto ácido, alcalino y microbiano. Los extractos de las muestras fueron cuantificados, evidenciando la cantidad de ADN e inhibidores, con estos resultados se obtuvieron diferencias y similitudes entre las metodologías, demostrando que el protocolo de desmineralización obtuvo los mejores resultados de cuantificación. Asimismo, se pudo comprobar que el tamaño del poro de las columnas de purificación y los dispositivos de ultrafiltración son necesarios para obtener ADN con el éxito deseado.