PCR en tiempo real y análisis de fusión de alta resolución de amplicones obtenidos de cebadores dirigidos al minicírculo del kinetoplasto para la detección de Leishmania

Abstract

Evalúa el desempeño de la reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real y análisis de fusión alta resolución de amplicones obtenidos de cebadores dirigidos al minicírculo del kinetoplasto para la detección de Leishmania. El presente estudio es cuantitativo, descriptivo y transversal no experimental. Se usó 9 cultivos almacenados (C1 a C9) de Leishmania, cuyo comportamiento de crecimiento fue evaluado in vitro. Para la PCR en tiempo real y análisis de fusión de alta resolución (PCR HRM), se seleccionaron cebadores empleados en la bibliografía. Con el ADN obtenido de los cultivos, se realizó la PCR HRM y se analizó las temperaturas de fusión halladas, además, se determinó el límite de detección mediante diluciones seriadas. Los recuentos parasitarios de los cultivos C1 al C5 obtuvieron de 30 a 100 millones de parásitos por mL al inicio de la fase estacionaria, y los cultivos C6 al C9 alcanzaron recuentos cercanos al inóculo inicial de 500 parásitos por mL. Se concluye que los cebadores seleccionados determinaron el género y subgénero de los 9 cultivos de Leishmania; los cebadores PASSOS F-PASSOS R a través de la PCR HRM determinaron en los cultivos utilizados los dos subgéneros L. Leishmania y L. Viannia con Tm diferentes entre estos dos grupos. Los cebadores MP1L-MP3H determinaron el subgénero L. Viannia en los cultivos C6 al C9 sin diferencias en sus Tm; y los cebadores PASSOS F-MP3H que amplificaron los cultivos C6 al C9 no hallaron diferencias concluyentes en sus Tm.