Cinética de expresión del factor de necrosis tumoral alfa (TNF- α) e interleucina 1 alfa (IL-1α) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna Pacos) sanas y con enteropatía

Abstract

El factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) y la interleucina 1 alfa (IL-1α) son citoquinas proinflamatorias de suma importancia en la respuesta inmunitaria innata precoz frente a patógenos o injurias. El objetivo de este estudio fue determinar mediante la técnica de RT-PCR Tiempo Real, la presencia y los niveles relativos de expresión de ARNm del TNF-α e IL-1α en mucosa intestinal de crías de alpacas sanas y con enteropatía. También se obtuvieron cortes histológicos yeyunales provenientes de los animales enfermos y se realizó el análisis histopatológico del tejido utilizando la tinción Hematoxilina-Eosina. Se trabajaron 71 muestras de yeyuno de alpacas de 0 a 45 días de edad sanas (n=38) y enfermas (n=33). Se extrajo el ARN total de las muestras para luego proceder a la síntesis de las cadenas complementarias de ADN (ADNc). Posteriormente se realizó la PCR convencional y la RT-PCR en tiempo real. Los resultados determinaron que el 98.6% (70/71) de las muestras amplificaron un producto específico para TNF-α y el 100% (71/71) para IL-1α, evidenciados en la electroforesis mediante bandas en gel de agarosa. El análisis de las curvas de disociación, determinó que los productos amplificados con el set de oligonucleótidos para TNF-α fueron específicos y tuvieron una temperatura de disociación (Tm) entre 85.10ºC y 86ºC; similarmente, los productos de la IL-1α fueron específicos con una Tm entre 78.80ºC y 79,70ºC. La cuantificación relativa del ARNm durante la RT-PCR en tiempo real, utilizando los valores de ciclos umbrales (Cts) de cada muestra mediante el método (2 -∆∆Ct) con respecto a un calibrador; demostró que la expresión, tanto de TNF-α como de IL-1α, fue mayor en alpacas enfermas que en sanas en forma significativa (P<0.05). Los niveles de expresión de ambas citoquinas mostraron una tendencia creciente en las primeras 4 semanas de vida y una caída paulatina en la quinta y sexta semana en animales sanos; mientras que en animales enfermos no existió asociación entre la expresión de las citoquinas y la edad. La enteritis necrótica y la entertitis necrótica asociada a Eimeria spp. fueron las patologías que indujeron a una mayor expresión de TNF-α e IL-1α respectivamente.