Título: Diseño y estandarización de un método de diagnóstico molecular para la detección de SARS-CoV-2
Asesor(es): Rojas Montes, Miguel Ángel
Campo OCDE: https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#4.03.01
Fecha de publicación: 2023
Institución: Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Resumen: Estandariza una reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa (RTPCR)
y una reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa en tiempo real
(qRT-PCR) dirigida al gen de la nucleocápside (N) del SARS-CoV-2. Ello utilizando un
control positivo sintético (200.000 copias/μL del gen N) y como controles negativos a
coronavirus de los géneros α-CoV, β-CoV, γ–CoV y δ-CoV. Para realizar esto, primero se
utilizó herramientas bioinformáticas para diseñar los oligonucleótidos y la sonda
fluorescente específica (FAM), luego se evaluó los oligonucleótidos diseñados mediante
PCR utilizando diferentes temperaturas con el objetivo de obtener la temperatura de
alineamiento, seguidamente se estandarizó la PCR en punto final, realizando diluciones
del control positivo del gen N sintético. Posteriormente, se sometió a una qRT-PCR,
utilizando diluciones en serie en base 10 del control positivo por triplicado para calcular
la curva estándar de la prueba. Al mismo tiempo, se ejecutó un kit comercial 2019-nCoV
RUO de la CDC para comparar nuestros resultados. Finalmente, nuestra prueba fue
evaluada usando muestras positivas a SARS-CoV-2 de heces de perros y gatos
confirmadas por secuenciación. Los resultados de ambas pruebas diseñadas fueron
satisfactorios, la RT-PCR amplificó el control positivo, muestras positivas y hubo
ausencia de amplificación en los controles negativos. Por otro lado, la qRT-PCR presenta
una eficiencia del 92.1%, con una detección mínima de 20 copias del gen por muestra,
valores similares al kit comercial de la CDC que muestra una eficiencia del 98% y 89%
para el gen N1 Y N2 respectivamente, con una detección mínima de 20 copias por
muestra; de tal manera que el kit desarrollado en el presente trabajo y el kit comercial de
qRT-PCR presentan resultados similares.
Disciplina académico-profesional: Medicina Veterinaria
Institución que otorga el grado o título: Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Facultad de Medicina Veterinaria. Escuela Profesional de Medicina Veterinaria
Grado o título: Médico Veterinaria
Jurado: Suárez Aranda, Fidel Francisco; Manchego Sayán, Alberto Gustavo; More Bayona, Juan Anderson
Fecha de registro: 27-dic-2023