Variación genética intraespecífica de Echinococcus granulosus en la sierra central y sur del Perú

Abstract

Echinococcus granulosus es el agente causal de la hidatidosis unilocular, patología de carácter endémico en amplias zonas de Perú. Actualmente la metodología del análisis molecular del ADN se ha utilizado para enriquecer los conocimientos sobre este parásito, a través del aislamiento de sus genes, el estudio de su estructura y organización, así como la expresión de los mismos. La aplicación de estas técnicas ha reconocido en E. granulosus un mínimo de 10 variedades o cepas..

La taxonomia y el estatus filogenético de las cepas de E. granulosus es controversial y esta bajo discusión; su variación genética ha sido analizada por la variación de las secuencias de los nucleótidos dentro de las regiones mitocondriales y nucleares del DNA. Estas variantes son referidas como cepas y han sido generalmente asignadas con el nombre del hospedero intermediario involucrado en el ciclo biológico del parásito. Se ha identificado la existencia de 10 genotipos (G1 – G10) de E. granulosus, esta variabilidad tiene implicaciones importantes en la patología de la enfermedad, desarrollo de vacunas, diagnóstico y administración de drogas efectivas.

En esta investigación, se han aislado quistes hidatídicos de ovinos, bovinos, porcinos y camélidos sudamericanos procedentes de Ayacucho, Cuzco, Pasco y Puno, departamentos pertenecientes a la sierra central y sur del Perú. La extracción del DNA fue con fenol –cloroformo – alcohol isoamílico; se aplicó un Nested-PCR usando el gen ribosomal ITS-1 y la genotipificación se hizo en base al uso de diferentes enzimas de restricción. De los dos patrones encontrados, los fragmentos producidos en el Nested- PCR fue amplificado y directamente secuenciado y a través de programas bioinformáticos se determinó la presencia de 2 variantes, una de las cuales corresponde a G1 y la otras probablemente restringida a nuestros camélidos sud-americanos. Aun cuando el número de aislados no es muy grande, el genotipo G1 (113/120) fue el de mayor prevalencia en los animales muestreados.

Echinococcus. granulosus endémico en algunas áreas de Perú, evidencia que los animales infectados con este parásito puede ser un potencial reservorio para infecciones humanas, además nuestros resultados constituyen un aporte importante para los programas de control que realizan una vigilancia continua de sus áreas endémicas a través de la implementación de un adecuado tratamiento de los animales infectados y el adiestramiento de los pobladores acerca de los riesgos de contraer la enfermedad y de las conductas adecuadas para el manejo de órganos infectadas.

En particular la existencia de diferentes patrones genéticos ha de contribuir a tomar medidas de importancia epidemiológica y a plantear estrategias posteriores donde el objetivo sea la prevención, tratamiento y control de las infecciones causadas por E. granulosus en sus diferentes hospederos de las distintas zonas endémicas de nuestro país.

-- Unilocular hidatidosis’s disease whose etiological agent is the tapeworm Echinococcus granulosus, affects differents endemic zones in Peru. At this time, the methodology of the molecular analysis of the DNA has been used for the knowledge of this parasite through isolation of its genes, the study of its structure and organization, as well as the expression of the same. The application of these techniques has revolutionized the study of this parasite, recognition a minimum of ten strains.

The taxonomic and phylogenetic status of Echinococcus granulosus strains are still controversial and under discussion; genetic variation in E. granulosus has been analyzed for DNA nucleotide sequence variation within of the region mitochondrial and nuclear region of the ribosomal of DNA. These variants are referrend to as strains, and they have been generally named after their typical intermediate hosts. To date, 10 genotypes (G1 – G10) of Echinococcus granulosus have been identified; this variability has important implications for the pathology of the disease, development of vaccines, diagnostic reagents and drugs effective against this parasite.

In this research, we isolate different hydatic cysts from ovines, bovines, pork and sudamerican camels, this samples was get from Ayacucho, Cuzco, Pasco and Puno, all belong from central highland and south of Peru. The DNA extraction was done with phenol- cloroform- isoamil alcohol. We did Nested-PCR using primers from ribosomal genes ITS-1, and then the genotyping was done with RFLP PCR using different cutting restriction enzymes. We found two genetics patterns. The representatives patterns, their fragments produced by nested-PCR were amplified and directly sequenced and then with Bioinformatics programs determine one patters belong G1 and others was probably restricted from south-American camels that live in high altitudes in Peru. Although the number of Peruvian isolates examined was not extensive, the G1 genotype (113/120) was far more prevalent in domestic animals. Besides ours dates constitute an important contribution for the Control programs that realize a continuous monitoring of endemic areas through the implementation of a suitable treatment of the animal infected and the training of the settlers about the risks of contracting the disease in contaminated areas and of the conducts adapted for the handling of infected organs.

In particular, the existence of different genotypes has to contribute to take measures from importance epidemiologist and to establish strategies where the objective is the prevention, treatment and control of the infections caused by E. granulosus in their different hosts from the different endemic zone from Peru.