Caracterización molecular del gen que codifica al receptor tipo-Toll 2 (TLR2) en alpacas (Vicugna pacos) y llamas (Lama glama)

Abstract

Caracteriza molecularmente la ORF (Open Reading Frame) completa del gen que codifica al TLR2 en alpacas y llamas. Para esto se colectaron 10 muestras de sangre de animales adultos (5 alpacas y 5 llamas) clínicamente saludables de cada especie, para la obtención de células mononucleares de sangre periférica por centrifugación. A partir de estas células se extrajo el ARN total y se evalúo la integridad del ARN y cantidad por fluorometría. El ARN viable fue sometido a una RT-PCR para la amplificación del ORF completo del TLR2. Los mejores productos fueron seleccionados para su clonación y secuenciación. Las secuencias de nucleótidos fueron editadas, ensambladas, alineadas y convertidas a secuencias de aminoácidos, usando los programas Chromas de Technelysium Pty Ltd y, SeqMan, EditSeq, y MegAlign Pro del paquete bioinformático DNASTAR Lasergene, respectivamente. Para el análisis filogenético se utilizó el software MEGA X, la predicción de los dominios estructurales de los TLR2 fue realizado utilizando los softwares en línea SMART y LRRsearch. Como resultado del estudio se obtuvo 3 clones, uno de alpaca y 2 de llamas, las 7 secuencias de dichos clones confirmaron la existencia de cómo mínimo 3 isoformas para este gen en alpacas y llamas. Al análisis filogenético se observa que dichas isoformas tienen una estrecha relación genética mostrando un porcentaje de similaridad que varía entre 99.1% al 99.5% cuando comparamos las secuencias de un mismo clon, y entre 97.6% al 99.5% cuando se comparan los diferentes clones. Las secuencias fueron comparadas con los genes predictivos de TLR2 en camélidos de viejo mundo obteniendo una similaridad en el rango de 96.1% al 96.7%. Nuestras 7 secuencias fueron anotadas y depositadas en el GenBank (MT350705 - MT350711). Se concluye que las isoformas de alpacas y llamas obtenidas en nuestro estudio son diferentes a las descritas en otros camélidos. Se espera que la metodología desarrollada en este estudio pueda ser replicada en animales enfermos, con el fin de poder identificar polimorfismo de un solo nucleótido (SNPs), para diferenciar genéticamente a los animales resistentes y susceptibles a infecciones en campo.