Caracterización funcional de la Fosfolipasa A2 ácida presente en el veneno de la serpiente Bothrops pictus

Abstract

Aislar y caracteriza la actividad biológica de la PLA2 ácida del veneno de B. pictus denominada BpTx-I. El veneno crudo de B. pictus se fraccionó empleando una cromatografía de intercambio catiónico en CM Sephadex C-25 seguido de una cromatografía de exclusión molecular usando un equipo de cromatografía líquida de presión media (MPLC) con una columna ENrich™Q SEC 70. Los casos de ofidismo en la costa central del Perú son ocasionados principalmente por la serpiente Bothrops pictus, especie endémica del país, cuyo veneno está compuesto por diversas toxinas, entre ellas la fosfolipasa A2 (PLA2) responsable de diversos efectos patológicos en el envenenamiento. No obstante, las PLA2s presentan también efectos farmacológicos de enorme potencial como el antineoplásico. En la investigación, la BpTx-I purificada representó el 1.03% del veneno total. La pureza fue corroborada mediante PAGE-SDS (15%) mostrando una única banda de 13 kDa a condiciones reductoras mientras que por MALDI-TOF se estimó un peso molecular de 13.86 kDa. La BpTx-I mostró actividad enzimática de 1.54 U*μmol/min*mL*mg sobre el sustrato cromogénico 4-nitro-3 [octanoiloxi] benzoico (NOBA); asimismo, tuvo actividad edemática (DEM: 10.127±3.632 μg); sin embargo, no generó efecto miotóxico. Por otro lado, mediante ELISA se encontró una alta reactividad del suero antibotrópico comercial (INS) frente a BpTx-I y B. pictus con títulos de 32000 y 64000 respectivamente. Este reconocimiento fue corroborado por Western Blot. Adicionalmente se evaluaron los efectos sobre la línea celular de cáncer de mama triple negativo MDA-MB-231 encontrando una reducción estadísticamente significativa sobre la viabilidad (15.6±6.2%) y migración celular (0.585±0.035) de BpTx-I a 20 μg/mL respecto al control. En conclusión, se purificaron y evaluaron los diversos efectos biológicos de BpTx-I, la cual es una PLA2 ácida que no presenta miotoxicidad, pero sí posee actividad formadora de edema, efecto antitumoral y es reconocida por el suero antibotrópico.