Caracterización Bioquímica de la actividad Lipolítica de Pseudoalteromonas Atlantica Aislada de la Bahía de Paracas

Abstract

Con el objetivo de caracterizar bioquímicamente la actividad lipolítica de Pseudoalteromonas atlantica PAR 2, aislada de la Bahía de Paracas (Ica), se procedió a cultivar la bacteria en medio LB (Luria-Bertani) a temperatura ambiente durante 24 horas. Para determinar la actividad lipolítica de la Pseudoalteromonas atlantica PAR 2, se utilizó agar SW 5 % con tributirina 1 % y se incubó a temperatura ambiente por 48 horas; la hidrólisis del sustrato se evidenció por la formación de un halo transparente. Así también, se cuantificó la actividad lipolítica utilizando como sustratos por un lado tween 80 y por otro, aceite de oliva al 1 %; los cuales no fueron degradados; esta respuesta evidenció que la enzima en estudio es una lipasa del grupo VI o esterasa. Por ese motivo, se utilizó como sustrato -nitrofenol acetato en buffer fosfato 25 mM pH 7, el producto liberado se midió por espectrofotometría a 405 m y se obtuvo una actividad enzimática de 79,32 mol/mL y una actividad específica de 661,00 mol/mg de proteína en el extracto crudo. Pseudoalteromonas atlantica PAR 2 produce una lipasa del grupo VI o esterasa, la cual además presenta actividad óptima a 20 ºC, pH 7 y concentración salina 5 %.

-- Palabras clave: Pseudoalteromonas atlantica, actividad lipolítica, esterasa, -nitrofenol acetato.

-- In order to characterize biochemically the lipolytic activity of Pseudoalteromonas atlantica PAR 2, isolated from the Bay of Paracas (Ica), it was proceeded to grow the bacteria in LB medium (Luria-Bertani) at environment temperature during 24 hours. To determine lipolytic activity of Pseudoalteromonas atlantica PAR 2, SW 5 % agar with tributyrin 1 % was incubated at environment temperature for 48 hours, where substrate hydrolysis was evidenced by the formation of a transparent halo. Additionally, lipolytic activity was quantified using as substrates Tween 80 on one side and on the other, olive oil, 1%, which were not degraded, this response revealed that the enzyme under study is a lipase or esterase group VI. For that reason, was used as substrate -nitrophenol acetate in 25 mM phosphate buffer pH 7, the released product was measured by spectrophotometry at 405 m and was obtained 79,32 mol/mL as enzymatic activity, and 661,00 mol/mg protein as specific activity in the crude extract. Pseudoalteromonas atlantica PAR 2 produces a lipase group VI or esterase, which also has optimal activity at 20 °C, pH 7 and 5% salt concentration.

-- Keywords: Pseudoalteromonas atlantica, lipolytic activity, esterase, -nitrophenol acetate