Desarrollo de una prueba inmunocromatográfica para la detección rápida de Bartonella bacilliformis

Abstract

Antecedentes: La Enfermedad de Carrión es una patología importante que requiere un diagnóstico precoz para su manejo a fin de disminuir la morbimortalidad de la misma. Objetivo: Desarrollar una prueba inmunocromatográfica para la detección rápida de Bartonella bacilliformis usando anticuerpos policlonales de conejo etiquetados con oro coloidal. Metodología: Los anticuerpos policlonales contra Bartonella bacilliformis fueron obtenidos mediante la inmunización de conejos con la proteína GroEL de Bartonella bacilliformis. Se utilizó oro coloidal de 40 nm para la conjugación el anticuerpo primario obtenido. La sensibilidad analítica se evaluó con diferentes concentraciones de B. bacilliformis incluidas en un rango de 1x101 UFC/mL a 1x105 UFC/mL. La especificidad analítica o reacción cruzada se analizó con microorganismo de diferentes especies, incluyendo Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans, Chlamydophila pneumoniae, Escherichia coli y Candida spp. Resultados: Las concentraciones óptimas del anticuerpo de captura y el anticuerpo de revestimiento (línea T) fueron de 2 mg/mL y 0.2 mg/mL respectivamente. Se determinó que la sensibilidad analítica de la prueba se encuentra en un rango de 1x102 UFC/mL y 1x101 UFC/mL. No se evidenciaron reacciones cruzadas con los microorganismos evaluados. Se determinó que el tiempo de corrida óptimo para el registro de resultados es de 20 minutos y el volumen mínimo requerido de la muestra analizada fue de 50 µL. Conclusión: Se desarrolló la primera prueba inmunocromatográfica para la detección rápida, sensible y específica de Bartonella bacilliformis utilizando anticuerpos policlonales contra la proteína GroEL, la cual deberá ser validada mediante estudios posteriores.

Background: Carrión's disease is an important disease that requires a timely diagnosis and management to reduce its morbimortality. Objective: Develop a lateral flow assay for the rapid detection of Bartonella bacilliformis using colloidal gold-labeled rabbit polyclonal antibodies. Materials and methods: Polyclonal antibodies against Bartonella bacilliformis were produced by the immunization of rabbits with GroEL protein purified from Bartonella bacilliformis. Colloidal gold of 40 nm was used for the conjugation process with the rabbit polyclonal antibodies. The analytical sensitivity was evaluated by testing solutions of B. bacilliformis with different concentrations ranging between 1 x 101 to 1 x 105 CFU/mL. Analytical specificity was determined by testing cross-reactivity with microorganisms from different species, including Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans, Chlamydophila pneumoniae, Escherichia coli and Candida spp. Results: The optimal concentrations for the capture antibody and the coating antibody (T-line) were 2 mg / mL and 0.4 mg / mL, respectively. The analytical sensitivity was determined to be between 1x102 CFU/mL and 1x101 CFU/mL. There were no cross-reactions observed with the groups of bacteria used in this study. We determined that the flowing time and volume required for an optimum signal to be generated was 20 minutes and 50 µL, respectively. Conclusions: We developed the first gold-based lateral flow assay for the rapid, sensitive and specific detection of Bartonella bacilliformis using polyclonal antibodies against the protein GroEL, which needs to be validated in future studies.