Caracterización físico-química y acción antifúngica de una lectina aislada de semillas de Buddleja coriacea Remy “colle negro”

Abstract

El presente trabajo de investigación se realizó en el Laboratorio de Fisiología Animal de la Universidad de San Agustín (Arequipa) y el Laboratorio de Química de Proteínas (LAQUIP) del Instituto de Biología de la Universidad Estatal de Campinas (Brasil). Se purificó una lectina de semillas de Buddleja coriacea R. (“colle negro”, Buddlejaceae) mediante dos pasos cromatográficos: cromatografía de exclusión molecular en Sephadex G75 y cromatografía líquida de alta precisión de fase reversa (HPLC). La electroforesis bidimensional (2D) en SDS-PAGE demostró que la lectina es homogénea con un único spot proteico de ~ 12 kDa y un punto isoeléctrico de 5.3. Su peso molecular fue confirmado por Espectrometría de Masa (MALDI-TOF) donde se reveló como una proteína de 12 630.1405 Da. El análisis de composición de aminoácidos mostró que la lectina de Buddleja coriacea R. (BCL) es ácida y altamente hidrofóbica (21% residuos ácidos y 41% residuos hidrofóbicos). La estructura primaria reveló que la lectina BCL esta compuesta de 119 aminoácidos. Los estudios de homología secuencial con otras lectinas, mostraron que la lectina BCL tiene mayor homología (96,60%) con la lectina extraída de semillas de Cratylia mollis (Leguminosae) y 89,90% con la lectina extraída de semillas de Cratylia argentea. Según el árbol filogenético, BCL presenta una aproximación microevolutiva ~ 2000 nucleótidos con la lectina extraída de Cratylia mollis. BCL aglutinó grupos sanguíneos: “A”, “B” y “AB” Rh (+) con una concentración mínima hemaglutinante (CMH) de 1,3 g/mL. Esta actividad hemaglutinante fue inhibida por D-lactosa y D-manosa (0,048 y 0,097 mM, respectivamente) y los agentes quelantes: EDTA (25 mM) y EGTA (25 mM). Asimismo, BCL presentó actividad antifúngica sobre el crecimiento de Fusarium oxysporum con una concentración de 20 g/mL.