Evaluación de diferentes tiempos para la maduración nuclear de ovocitos de llama (lama glama) en el desarrollo de embriones producidos por fecundación in vitro

Abstract

La investigación se ha realizado en el Laboratorio de Biotecnologías Reproductivas de la Universidad Nacional de Huancavelica ubicado en el distrito, provincia, región de Huancavelica a 3680 m.s.n.m. con el objetivo de determinar el tiempo óptimo de maduración nuclear de ovocitos de llama (Lama glama) en el desarrollo de embriones producidos por fecundación in vitro, para el que se recuperaron 1100 ovocitos de 178 ovarios (89 llamas) de animales que fueron beneficiados en el camal municipal de Huancavelica; se utilizaron 672 ovocitos de categoría 1 y 11 obtenidos por aspiración folicular de ovarios de llamas, fueron madurados en medio TCM-199 suplementado con HEPES 25mM, piruvato de sodio 0.2 mM, sulfato de gentamicina 50 Ug/ml, FSH 0.02 unidades/mi, Estradiol17-B 1 Ug/ml y suero fetal bovino al 10%, e incubados a 38.5°C en una atmósfera de aire estéril con 5% CO2. 5% O(2y) 90% N2, por espacio de 28, 36 y 42 horas. Transcurrido estos tiempos, los ovocitos fueron retirados del medio y sumergidos en una solución de hialuronidasa al 0.1% para ser separados de las células del cúmulo. Los ovocitos fueron fijados en una solución de metano!: ácido acético (3:1) y teñidos con orseina acética al 1% para evaluar el estadía de maduración nuclear (vesícula germinal- VG, vesícula germinal rota-GVBD, metafase I-MI, metafase II-MII). Luego, se realizó la fecundación in vitro y se evaluó el desarrollo embrionario, para lo cual se procedió a madurar los ovocitos del mismo modo que en el ensayo anterior, conservando los tiempos de 28, 36 y 42 horas. Se recuperaron espermatozoides epididimarios en medio Sperm- TALP para luego ser lavados y seleccionados mediante la técnica de Swim-up, se utilizó una concentración promedio de 1.5-2x10(6) espermatozoides/mi para inseminar los ovocitos. Transcurridas las 18 h de fecundación, los presuntos cigotos fueron transferidos al medio SOF-IVC e incubados por 7 días a 38.5°C, en una atmósfera de aire estéril con 5% C02 y 90% de humedad. Los resultados obtenidos muestran que el mayor porcentaje de maduración nuclear (ovocitos en estadio de metafase 11- Mil) de cultivo in vitro, está entre 36 y 42 horas (70.17±4.21% y 70.53±3.72%) respectivamente, seguida de 28 horas (49.14±2.79%) con diferencias estadísticas significativas (p <0.05). Por otra parte, en cuanto a los resultados del desarrollo embrionario, se obtuvo los porcentajes de segmentación, mórula y blastocisto (51.00±3.31%,71.47±2.49% y 11.64±1.30%) respectivamente para 36 horas y el porcentaje de segmentación, mórula y blastocisto (49.55±3.56%,76.69±2.90% y 12.51 ±2.22%) respectivamente para 42 horas, sin encontrarse diferencias estadísticas entre los tratamientos (p>0.05). Se concluye que el tiempo óptimo que requiere los ovocitos de llama para llegar a la madurez nuclear (metafase 11) está entre 36 y 42 horas, encontrando la misma capacidad de desarrollo embrionario in vitro en este mismo periodo de tiempo, bajo las condiciones del presente estudio.