Desinfección y medios de cultivo para la micropropagación de una accesión y un mutante de Stevia rebaudiana Bertoni

Abstract

El cultivo in vitro es un método de propagación vegetativo que permite obtener plántulas uniformes, rápida multiplicación clonal e ideal para conservar características genotípicas. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la influencia de la desinfección superficial y medios de cultivo en cada una de las etapas de micropropagación in vitro (inicio, multiplicación y enraizamiento) para una accesión y un mutante de stevia. En la desinfección superficial se desarrollaron ocho tratamientos (3; 5; 10; 25 minutos de sumergimiento en 1 % y 1,8 % de NaClO). Se evaluó la consistencia (líquido y sólido) y concentración (50 % y 100 %) de sales del medio MS como medio de inicio. También se comparó el tipo de envase para la propagación. En la etapa de multiplicación in vitro se determinó la influencia de kinetina (0,3; 4 y 6 mg/L) sembrados en medios sólido con 50 % y 100 % de sales de MS. En la etapa de enraizamiento in vitro se evaluó la de auxina (0,5; 1 y 2 mg/L de AIB y 0,1; 0,2 y 0,5 mg/L de ANA). Finalmente se comparó algunas características morfológicas de la accesión Miskibamba y un mutante en el mejor medio obtenido. Para la desinfección resultó mejor sumergir durante 3 minutos en 1,8 % de NaClO. Los medios de inicio elegidos fueron con 50 % y 100 % de sales de MS sólido. El uso de los frascos de vidrio fue ideal para la propagación in vitro. El medio de cultivo para la multiplicación y enraizamiento in vitro fue MS + 0,2 mg/L de ANA, porque permitió obtener plántulas con mayor longitud, número de entrenudos, hojas y raíz, y en consecuencia mayor número de explantes para subcultivar. Las plántula mutantes tuvieron mejor longitud, hojas y raíz en medio de MS sin regulador de crecimiento, mientras el original en MS + 0,2 mg/L de ANA.

In vitro culture is a vegetative propagation method that allows obtaining uniform seedlings, fast clonal multiplication and ideal for preserving genotypic characteristics. The objective of this work was to determine the influence of surface disinfection and culture media in each of the stages of in vitro culture (initiation, multiplication and rooting) for an accession and a stevia mutant. In surface disinfection, eight treatments were developed (3; 5; 10; 25 minutes of immersion in 1 % and 1,8 % NaClO). The consistency (liquid and solid) and concentration (50 % and 100 %) of salts of the MS medium as starting medium were evaluated. The type of container for propagation was also compared. In the in vitro multiplication stage, the influence of kinetin (0,3; 4 and 6 mg/L) seeded in solid media with 50 % and 100 % MS salts was determined. In the in vitro rooting stage, auxin was evaluated (0,5; 1 and 2 mg/L of IBA and 0,1; 0,2 and 0,5 mg/L of ANA). Finally, some morphological characteristics of the Miskibamba accession and a mutant were compared in the best medium obtained. For disinfection it was better to immerse for 3 minutes in 1,8 % NaClO. The chosen starting media were 50 % and 100 % solid MS salts. The use of the glass vials was ideal for in vitro propagation. The culture medium for in vitro multiplication and rooting was MS + 0,2 mg/L ANA, because it allowed obtaining seedlings with greater length, number of internodes, leaves and roots, and consequently a greater number of explants to subculture. The mutant seedlings had better length, leaves and root in MS medium without growth regulator, while the original in MS + 0,2 mg/L of ANA.