Look-up in Google Scholar
Title: Evaluación de la actividad inhibitoria de péptidos sintéticos seleccionados sobre PknG de Mycobacterium tuberculosis
Advisor(s): Alcántara Estela, Roberto Hugo
OCDE field: http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.00.00; https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.00
Issue Date: 20-Jan-2023
Institution: Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC)
Abstract: Introducción: La identificación de nuevos blancos terapéuticos y compuestos antimicrobianos son claves en la lucha contra la tuberculosis resistente a drogas. PknG es un factor de virulencia de Mycobacterium tuberculosis asociado con la supervivencia intracelular y estado de latencia, el cual se considera una diana promisoria. Objetivos: Evaluar la actividad inhibitoria de péptidos sintéticos seleccionados para PknG a través de un ensayo de luminiscencia. Métodos: Las proteínas recombinantes PknG y GarA fueron expresadas y purificadas mediante cromatografía de afinidad. La reacción de fosforilación de PknG y su inhibición se evaluaron mediante un ensayo de luminiscencia. Para la estandarización de la reacción de fosforilación se evaluó la composición del buffer, el tipo de ion divalente como cofactor, y el tiempo de reacción. Como control de inhibición se utilizó la molécula AX20017. Se determinó el porcentaje de inhibición para los péptidos candidatos. Resultados: Se obtuvieron alícuotas de PknG y GarA a una concentración de 145 µM y 231 µM, respectivamente. La reacción de fosforilación fue estandarizada a 181.2 nM PknG, 7.7 µM GarA y 10 µM ATP, utilizando el buffer PR1 (25 mM HEPES pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 5 mM MgCl2). AX20017 reportó una IC50 de 6.71 µM. Seis de los péptidos seleccionados demostraron un porcentaje de inhibición superior al 30%. De estos, UPC_07, UPC_08 y UPC_09 mostraron valores cercanos a 39%. Conclusiones: Se estandarizó un ensayo de luminiscencia in vitro para evaluar la inhibición de la actividad quinasa de PknG sobre GarA. Tres péptidos mostraron porcentajes de inhibición superiores a 38%

Introduction: The identification of new therapeutic targets and antimicrobial compounds are key against drug-resistant tuberculosis. PknG is a virulence factor of Mycobacterium tuberculosis associated with intracellular survival and latency, which is considered a promising target. Objectives: To evaluate the inhibitory activity of selected synthetic peptides for PknG through a luminescence assay. Methods: Recombinant PknG and GarA proteins were expressed and purified by affinity chromatography. PknG phosphorylation reaction and inhibition were assessed by a luminescence assay. For the standardization of the phosphorylation reaction, the composition of the buffer, type of divalent ion as cofactor, and reaction time were evaluated. As inhibition control, AX20017 was used. The percentage inhibition for the candidate peptides was determined. Results: Aliquots of PknG and GarA were obtained at a concentration of 145 µM and 231 µM, respectively. The phosphorylation reaction was standardized to 181.2 nM PknG, 7.7 µM GarA and 10 µM ATP, using PR1 buffer (25 mM HEPES pH 7.5, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 5 mM MgCl2). AX20017 reported an IC50 of 6.71 µM. Six of the selected peptides demonstrated an inhibition percentage higher than 30%. Of these, UPC_07, UPC_08 and UPC_09 showed values close to 39%. Conclusions: An in vitro luminescence assay was standardized to evaluate the inhibition of PknG kinase activity on GarA. Three peptides showed inhibition percentages higher than 38%.
Discipline: Medicina
Grade or title grantor: Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC). Facultad de Ciencias de la Salud
Grade or title: Médico cirujano
Juror: Ortiz Alfaro, Conrad; Del Valle Mendoza, Juana; Silva Caso, Wilmer
Register date: 15-Mar-2023



This item is licensed under a Creative Commons License Creative Commons