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Title: Caracterización de los péptidos del veneno del escorpión Hadruroides charcasus con efecto antibacteriano contra Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa
Advisor(s): Sialer Guerrero, Carlos Alberto
Issue Date: 2019
Institution: Universidad Nacional de Trujillo
Abstract: RESUMEN El objetivo de la presente investigación fue determinar la caracterización de los péptidos del veneno del escorpión Hadruroides charcasus con efecto antibacteriano frente a Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Las proteínas del veneno del escorpión H. charcasus fue cuantificado por el método de relación de absorbancias [mg/mL]= (1,56 x Abs 280nm) (0,76 x Abs 260nm). Para la separación se emplearon 15,46 mg de las proteínas, primero una cromatografía de filtración Sephadex G-75 y luego una cromatografía de intercambio iónico CM Sephadex C-25, después se realizó un perfil de las proteínas mediante HPLC en fase reversa, con una columna analítica Chromolith RP-18e, luego electroforesis en condiciones desnaturalizantes (PAGE-SDS), usando gel al 15,0 % de entrecruzamiento. Para evaluar el efecto antibacteriano se empleó el método de microdilución y el método Kirby-Bauer con cepas de S. aureus ATCC 29213 y P. aeruginosa ATCC 27853. Los resultados demostraron mediante la cromatografía de filtración 5 picos agrupadas en 5 fracciones (F-I a F-V) y de la cromatografía de intercambio iónico 9 picos principales de proteína, agrupados en 7 fracciones (OP4R-1 a OP4R-7) con péptidos de naturaleza catiónica con rangos de peso de 4 KDa, 5,5 KDa, 6,4 KDa y 7,5 KDa. Del HPLC se mostraron 50 señales o picos eluidos del retentato del Amicon con tamaño de exclusión 10 KDa, 54 picos eluidos del retentato y 45 picos eluidos del difusato del Amicon con tamaño de exclusión de 3 KDa. El efecto antibacteriano, la fracción IV presentó una CMI de 3,6 mg/mL para la cepa S. aureus y P. aeruginosa no presentó CMI a las concentraciones evaluadas. A través del método Kirby-Bauer la fracción OP4R-5 a una concentración de 1 μg/μL mostró un halo de inhibición de 9,3 mm para S. aureus y 9,2 mm para P. aeruginosa. Se llegó a la conclusión que el veneno del escorpión H. charcasus presentó péptidos de naturaleza catiónica con efecto antibacteriano frente a S. aureus y P. aeruginosa.
Note: ABSTRACT The objective of the present investigation was to determine the characterization of the peptides of the scorpion venom Hadruroides charcasus with antibacterial effect against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa. Scorpion venom proteins H. charcasus was quantified by the absorbance ratio method [mg / mL] = (1.56 x Abs 280nm) (0.76 x Abs 260nm). For the separation, 15.46 mg of the proteins were used, first a Sephadex G-75 filtration chromatography and then a CM Sephadex C-25 ion exchange chromatography, then a profile of the proteins was performed by reverse phase HPLC, with a Chromolith RP-18e analytical column, then electrophoresis under denaturing conditions (PAGE-SDS), using 15.0% cross-linking gel. To evaluate the antibacterial effect, the microdilution method and the Kirby-Bauer method with strains of S. aureus ATCC 29213 and P. aeruginosa ATCC 27853 were used. The results demonstrated by filtration chromatography 5 peaks grouped into 5 fractions (FI to FV) and ion exchange chromatography 9 major protein peaks, grouped in 7 fractions (OP4R-1 to OP4R-7) with cationic peptides with weight ranges of 4 KDa, 5.5 KDa, 6.4 KDa and 7.5 KDa. The HPLC showed 50 signals or peaks eluted from the Amicon retentate with a 10 KDa exclusion size, 54 eluted retentate peaks and 45 eluted Amicon diffusate peaks with a 3 KDa exclusion size. The antibacterial effect, fraction IV presented a MIC of 3.6 mg / mL for the S. aureus strain and P. aeruginosa did not present MIC at the concentrations evaluated. Through the Kirby-Bauer method, the OP4R-5 fraction at a concentration of 1 μg/μL showed an inhibition halo of 9.3 mm for S. aureus and 9.2 mm for P. aeruginosa. It was concluded that the scorpion venom H. charcasus presented cationic peptides with antibacterial effect against S. aureus and P. aeruginosa.
Discipline: Doctorado en Microbiología
Grade or title grantor: Universidad Nacional de Trujillo.Escuela de Posgrado
Grade or title: Doctor en Microbiología
Register date: 3-Oct-2019



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