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Guevara Vásquez, Ana María del Carmen
Llontop López, Nuria Gabriela
2019-06-13T14:08:34Z
2019-06-13T14:08:34Z
2019
https://hdl.handle.net/20.500.14414/12726
The quality of life for many is affected by a hypofunction of the salivary glands, as this condition is serious, there are no treatments that allow it to be reversed. Saliva is controlled by the SNA and the brain centers. Parasympathetic secretion is associated with a large volume of fluid and low protein concentration; while, the sympathetic secretion is of smaller volume and a greater concentration of protein, the latter requires an apical route of efflux of Cl-. Three channels of Cl- have been described in the acinar cells of the mouse salivary gland: CaCC encoded by the Tmem16A gene, a channel activated by hyperpolarization encoded by the ClC-2 gene, and an anion channel activated by an increase in the volume (VRAC). Past studies have already shown that the stimulation of beta-adrenergic receptors activates a salivary secretion pathway that does not depend on Tmem16A or ClC-2 channels. It was then hypothesized that the efflux of Cl- required in the cAMP-dependent secretion occurs through VRAC. The expression of genes such as Slc4a3 (Ae3) and Slc4a4 (NBCe1) that code for HCO3- transporters have also been postulated as candidates. The technique of genetic silencing by means of shRNA (small hairpin RNA), is a technique performed in the nucleus that serves to inhibit the activity of a specific gene. The purpose of this thesis was to design and construct vectors to suppress the expression of the Lrrc8d, Slc4a3 and Slc4a4 genes in mouse salivary glands, which are postulated as ion transport proteins that play an important role in cAMP-dependent salivary secretion. Thus, shRNAs were designed that have sequence complementarity with the mRNA of Lrrc8d, AE3 (Slc4a3), Nbce1 (Slc4a4), then the shRNA was cloned in the vector pMKO.1 pure / pMKO.1-GFP and its appropriate insertion was verified by sequencing technique, finally to confirm the deletion in the expression of the genes, RT-PCR was performed in the mouse C2C12 cell line, obtaining the blockade of the expression of the Lrrc8d and Slc4a3 genes, unlike the Slc4a4 that could not get to be transfected (es_PE)
La calidad de vida para muchos se ve afectada por una hipofunción de las glándulas salivales, al ser grave esta afección no cuenta con tratamientos que permitan revertirla. La saliva, está controlada por el SNA y los centros cerebrales. La secreción parasimpática se asocia con un gran volumen de líquido y baja concentración de proteínas; mientras que, la secreción simpática es de menor volumen y una mayor concentración de proteína, esta última requiere de una ruta apical de eflujo de Cl-. Tres canales de Cl- se han descrito en las células acinares de la glándula salival del ratón: CaCC codificado por el gen Tmem16A, un canal activado por hiperpolarización codificado por el gen ClC-2, y un canal de aniones activado por un aumento en el volumen (VRAC). Estudios pasados ya demostraron que la estimulación de los receptores beta-adrenérgicos activa una vía de secreción de saliva que no depende de canales Tmem16A o ClC-2. Entonces se hipotetizó que el eflujo de Cl- requerido en la secreción dependiente de cAMP ocurre a través de VRAC. La expresión de genes como Slc4a3 (Ae3) y Slc4a4 (NBCe1) que codifican para transportadores de HCO3-, también han sido postuladas como candidatos. La técnica de silenciamiento genético por medio de shRNA (small hairpin RNA), es una técnica realizada en el núcleo que sirve para inhibir la actividad de un gen específico. El propósito de esta tesis fue diseñar y construir vectores que permitan suprimir la expresión de los genes Lrrc8d, Slc4a3 y Slc4a4 en glándulas salivales de ratón, los cuales se postulan como proteínas transportadoras de iones que juegan un rol importante en la secreción salival dependiente de AMPc. Es así que se diseñaron shRNA que tengan complementariedad de secuencia con el mRNA de Lrrc8d, AE3 (Slc4a3), Nbce1 (Slc4a4), posteriormente se clonaron los shRNA en el vector pMKO.1 puro/pMKO.1-GFP y su adecuada inserción fue verificada mediante técnica de secuenciación, finalmente para confirmar la supresión en la expresión de los genes, se realizó RT-PCR en línea celular C2C12 de ratón, obteniendo el bloqueo de la expresión de los genes Lrrc8d y Slc4a3, a diferencia del Slc4a4 que no pudo llegar a ser transfectado (es_PE)
Tesis (es_PE)
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Universidad Nacional de Trujillo (es_PE)
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Universidad Nacional de Trujillo (es_PE)
Repositorio institucional - UNITRU (es_PE)
VRAC (es_PE)
Lrrc8d (es_PE)
Slc4a3 (es_PE)
shRNA (es_PE)
RT-PC (es_PE)
Diseño y construcción de vectores para suprimir la expresión de los genes Lrrc8d, Slc4a3, Slc4a4 mediante la técnica shRNA (es_PE)
info:eu-repo/semantics/bachelorThesis (es_PE)
Universidad Nacional de Trujillo.Facultad de Farmacia y Bioquímica (es_PE)
Farmacia (es_PE)
Título Profesional (es_PE)
Químico Farmacéutico (es_PE)
Pública



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