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Title: Diseño de un sistema pet-pcr in house para el diagnóstico molecular de plasmodium falciparum y plamodium vivax
Advisor(s): Gutiérrez Román, Ana Isabel Flor; Nolasco Cárdenas, Oscar Patricio
OCDE field: https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.00
Issue Date: 3-Dec-2019
Institution: Universidad Nacional Federico Villarreal
Abstract: Por muchas décadas el diagnóstico de la malaria, enfermedad causada por el protozoario Plasmodium spp., ha estado y sigue basado en el análisis microscópico de la gota gruesa. En el contexto del plan de fase hacia la eliminación de la Malaria, es importante detectar y tratar la malaria asintomática y subpatente para lo cual se requiere implementar nuevas herramientas diagnosticas como los sistemas de técnica molecular que permitan una alta sensibilidad y así eliminar los reservorios de la enfermedad. Con este fin, se desarrolló un sistema de amplificación PET (Photo-Induced Electron Transfer) PCR para comparar con otras plataformas molecular y determinar su sensibilidad y especificidad analítica. Se diseñaron cebadores específicos usando como genes de referencia PFr364 y Pvr47 para detectar Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax, respectivamente. Se estandarizó las condiciones de amplificación para determinar la temperatura de alineamiento y la concentración de cebadores a usar. Así mismo, se evaluaron diferentes parámetros como el rango dinámico de amplificación, el límite de cuantificación, el límite de detección, la especificidad analítica, la repetitividad y reproducibilidad para métodos cuantitativos, tanto en sistema singleplex como en multiplex. Finalmente, se evaluó un grupo de muestras, previamente analizados por gota gruesa y qPCR SybrGreen, comparando los resultados obtenidos. En comparación con el sistema qPCR en SybrGreen, el sistema PET-multiplex permite la detección de P. falciparum y P. vivax indistintamente, sin el uso de herramientas adicionales como temperatura de melting, permitiendo la identificación de infecciones mixtas. Así el sistema PET permite la detección de infecciones menores a 1 parásito/ μl, encontrándose en el rango de infecciones submicroscópicas.
Discipline: Biología
Grade or title grantor: Universidad Nacional Federico Villarreal. Facultad de Ciencias Naturales y Matemática
Grade or title: Licenciado en Biología
Juror: Maldonado Peña, Maria; Yupanqui Siccha, Gisela; Iannacone Oliver, José
Register date: 26-Dec-2019; 26-Dec-2019



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