Bibliographic citations
Chavez, G., (2018). Construcción de una biblioteca de plásmidos para la producción de oligopéptidos de variadas secuencias en la levadura ( Saccharomyces cerevisiae) [Universidad Nacional Agraria La Molina]. https://hdl.handle.net/20.500.12996/3736
Chavez, G., Construcción de una biblioteca de plásmidos para la producción de oligopéptidos de variadas secuencias en la levadura ( Saccharomyces cerevisiae) []. PE: Universidad Nacional Agraria La Molina; 2018. https://hdl.handle.net/20.500.12996/3736
@misc{sunedu/3016922,
title = "Construcción de una biblioteca de plásmidos para la producción de oligopéptidos de variadas secuencias en la levadura ( Saccharomyces cerevisiae)",
author = "Chavez Untiveros, Giuliana Paola",
publisher = "Universidad Nacional Agraria La Molina",
year = "2018"
}
Las bibliotecas de plásmidos son consideradas fuente de diversidad porque agrupan a fragmentos clonados con diferentes secuencias que se pueden emplear en ensayos de tamizaje. Para la presente investigación se construyó una biblioteca de plásmidos con insertos semialeatorios, que será empleada posteriormente para la identificación de oligopéptidos con actividad fotoprotectora. Las secuencias de los oligopéptidos incluirán a los aminoácidos triptófano (Trp o W) y tirosina (Tir o Y), los cuales poseen potencial actividad fotoprotectora, y a otros aminoácidos introducidos aleatoriamente. Esta construcción se realizó tomando ventaja de la capacidad de la levadura Saccharomyces cerevisiae de realizar el clonaje de fragmentos in vivo por recombinación homóloga. Se realizó una prueba preliminar para optimizar el protocolo de clonaje in vivo empleando el plásmido de expresión pEGH, y un fragmento único para la expresión de un oligopéptido compuesto únicamente de residuos de Trp y Tir (Fragmento WY). Una vez optimizado el protocolo de clonaje, se realizó la construcción de la biblioteca empleando los fragmentos semialeatorios que incluyen secuencias codificantes para aminoácidos aleatorios y para algunos residuos de Trp y Tir. Los plásmidos obtenidos de algunos transformantes de Saccharomyces cerevisiae fueron luego recuperados y amplificados en Escherichia coli para proceder a su purificación. Estos plásmidos purificados fueron analizados para determinar las frecuencias con las que se logró obtener la inserción de los fragmentos. Según estos ensayos, las eficiencias de clonaje fueron de 86 por ciento para el fragmento WY y de 50 a 69 por ciento para los fragmentos semialeatorios. Estos resultados permitieron concluir que el clonaje in vivo en S. cerevisiae es un método eficiente para la construcción de bibliotecas de plásmidos.
This item is licensed under a Creative Commons License