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Mansilla, S., (2021). Clonación en plásmidos para la producción y secreción de péptidos o proteínas en Saccharomyces cerevisiae” [Universidad Nacional Agraria La Molina]. https://hdl.handle.net/20.500.12996/4690
Mansilla, S., Clonación en plásmidos para la producción y secreción de péptidos o proteínas en Saccharomyces cerevisiae” []. PE: Universidad Nacional Agraria La Molina; 2021. https://hdl.handle.net/20.500.12996/4690
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title = "Clonación en plásmidos para la producción y secreción de péptidos o proteínas en Saccharomyces cerevisiae”",
author = "Mansilla García, Sandy Nelly",
publisher = "Universidad Nacional Agraria La Molina",
year = "2021"
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El presente trabajo tuvo como objetivo investigar la secreción de glutatión S-transferasa (GST) y oligopéptidos en Saccharomyces cerevisiae mediante la clonación de los respectivos genes en plásmidos. La clonación se realizó mediante la técnica denominada “in vivo”, y su correcta ejecución fue comprobada mediante PCR y posterior secuenciación. Los plásmidos construidos incluían las secuencias codificantes para dos tipos de péptidos señal: el PS-Alfa (derivado del factor de apareamiento alfa) y un PS-Sintético (diseñado a partir de secuencias de consenso derivadas de las proteínas Yps1/Yap3/TA57). La producción y secreción de GST fueron comprobadas mediante ensayos de Western blot, obteniendo como resultado la detección de bandas del tamaño esperado (26 kDa) y otras de mayor tamaño, dependiendo del péptido señal (PS) utilizado. A pesar de estas diferencias, las eficiencias de secreción observadas fueron similares. Sin embargo, la GST hallada intracelularmente para el caso del PS-sintético mostró mayor tamaño, sugiriendo una mayor cantidad de glicosilaciones. Posteriormente, se desarrolló un ensayo que permite comparar los efectos fotoprotectores de péptidos previamente identificados en nuestro laboratorio. Se evaluó la capacidad de supervivencia de las células transformadas con los plásmidos de secreción, sometiéndolas a irradiación UV. Los resultados sugieren una moderada capacidad fotoprotectora pero se requiere ampliar estos estudios. En conclusión, la maquinaria de recombinación homóloga de S. cerevisiae permite la óptima clonación de insertos para la construcción de plásmidos. La proteína GST puede ser secretada utilizando los péptidos señal PS-Alfa y PS-Sintético, pero este último causa un mayor número de modificaciones.
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