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Perona, F., Timoteo, A. (2017). Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros [Tesis, Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC)]. http://hdl.handle.net/10757/622683
Perona, F., Timoteo, A. Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros [Tesis]. PE: Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC); 2017. http://hdl.handle.net/10757/622683
@misc{sunedu/3007962,
title = "Producción del dominio c-terminal del factor de iniciación IF2 de Escherichia coli y Geobacillus stearothermophilus como blanco de posibles aptámeros",
author = "Timoteo Prado, Adriana",
publisher = "Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC)",
year = "2017"
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Introducción: El factor de iniciación IF2 tiene diferentes funciones en la iniciación de la traducción de proteínas. Su dominio C-terminal interacciona fuertemente con fMet-tRNA. El objetivo principal de este estudio es aislar un aptámero específico para IF2 CTD de Geobacillus stearothermophilus y Escherichia coli. Métodos: Se utilizó el sistema de expresión de proteínas basado en E. coli BL21. E. coli BL21 se transformó con un plásmido que contiene la secuencia InfB CTD. La inducción de proteínas se realizó bajo diferentes temperaturas y concentraciones de IPTG para cada proteína. La secuencia Hexa-His se agregó al gen infB permitiendo la purificación por cromatografía de afinidad. Resultados: IF2 CTD se purificó con alto rendimiento y pureza. La concentración de E. coli IF2 (558,0 ng/uL) fue tres veces mayor que la de G. stearothemophilus (144,6 ng/uL). Ambas proteínas se purificaron con una pureza > 95%. Mediante SELEX, se obtuvieron cuatro aptámeros para IF” CTD, de los cuales uno específicamente a IF2 CTD G. stearothemophilus. Conclusión: Se ha desarrollado un protocolo rápido y eficiente de purificación de proteína IF2 CTD, permitiendo la producción de fragmentos termofílicos y mesofílicos de IF2. El aptámero obtenido podría servir como un nuevo mecanismo inhibidor de la síntesis de proteínas en futuros estudios.
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