Optimizacion del ph y la temperatura en la actividad de inulinasa soluble de kluyveromyces marxianus fermentado en extracto de yacon

Abstract

El presente trabajo de investigación permitió estudiar la actividad de la enzima inulinasa (2,1- ß-D fructano fructanohidrolasa, EC 3.2.1.7), proveniente de un caldo de fermentación de Kluyveromyces marxianus usando extracto crudo de yacón (smallanthus sonchifolius) como fuente de carbono y energía, actuando sobre los sustratos sacarosa e inulina, a valores de pH y temperatura óptimos. Se obtuvo un extracto enzimático de inulinasa a partir de un cultivo en matraces de Kluyveromyces marxianus, en un medio que contiene extracto de yacón como fuente de carbono y energía, con los siguientes parámetros: Temperatura 30º C, velocidad de agitación 150 rpm en shaker y ajustamos el valor del pH con ácido ortofosfórico, volumen de medio líquido 20% (v/v) utilizando un medio establecido. Se utilizó el método experimental de optimización por un planeamiento factorial (Diseño Central Compuesto Rotacional – DCCR), seguido por un análisis o metodología de superficie de respuesta RSM. El diseño procederá para dos variables independientes, tratadas a cinco niveles diferentes, 11 ensayos como mínimo, que corresponderán a cuatro factoriales, cuatro axiales y tres puntos centrales. De acuerdo al método experimental se varió las condiciones de reacción: valores de pH (3–6) y valores de temperatura (40°C – 70°C). Determinándose la actividad por la técnica de velocidad inicial para cada tratamiento. Los valores óptimos del pH de la inulinasa sobre sacarosa e inulina coincidieron en 4.5 y los valores óptimos de Temperatura fueron 53.23 y 55°C. Los valores máximos de la actividad de la Inulinasa sobre sacarosa e Inulina fueron 61.57 y 3.54 U/mg, además las energías de activación fueron 7.51 y 5.59 Kcal/mol respectivamente.