Estandarización de protocolos para el enriquecimiento y aislamiento de ADN Genómico de parásitos de los géneros Plasmodium, Haemoproteus, Leucocytozoon causantes de la malaria aviar en la amazonia peruana.

Abstract

The study of malaria in birds in these last two decades has been increasing, for this, rapid and low-cost protocols are being developed for the extraction of genomic DNA, amplification and screening, allowing the presence of these hemoparasites to be detected. The objective of this research was to compare genomic DNA isolation protocols and to identify birds parasitized by the Plasmodium, Haemoproteus and Leucocytozoon genera that cause avian malaria in the Loreto Region, for which the salt precipitation protocol was used and modified ( Salting-out) and the method of isolation of blood cells by density gradient according to the conditions of the collected sample, proceeding to amplify by means of the Polymerase Chain Reaction in real time (qPCR) obtaining as results that the salt precipitation protocol showed better results in terms of its concentration and quality of ratios compared to the method of isolation of cells by density gradients, indicating that the DNA obtained does not present contaminants, being able to successfully carry out the identification of malaria avian by qPCR, identifying 170 parasitized birds where the Passeriforme order and the Thamnophilidae family are the groups with the highest numbers of infected birds. In conclusion, the standardized Salting out protocol is efficient for the detection of avian malaria, becoming a valuable tool in the field for the rapid detection and expansion of the investigation of these hemoparasites.

El estudio de malaria en aves en estas últimas dos décadas ha ido en aumento, para ello se desarrollan protocolos rápidos y de bajo costo para la de extracción de ADN genómico, amplificación y cribado, permitiendo detectar la presencia de estos hemoparásitos. El objetivo de esta investigación fue comparar protocolos de aislamiento del ADN genómico y realizar la identificación de aves parasitadas por los géneros Plasmodium, Haemoproteus y Leucocytozoon causantes de malaria aviar en la Región Loreto, para ello se utilizó y modificó el protocolo de precipitación por sales (Salting-out) y el método de aislamiento de células sanguíneas por gradiente de densidades según las condiciones de la muestra colectada, procediéndose amplificar mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa en tiempo real (qPCR) obteniendo como resultado que el protocolo de precipitación de sales mostró mejores resultados en cuanto a su concentración y calidad de ratios a comparación del método de aislamiento de células por gradientes de densidades, indicándonos que el ADN obtenido no presenta contaminantes pudiendo realizar con éxito la identificación de malaria aviar mediante qPCR, identificándose 170 aves parasitadas donde el orden Passeriforme y la familia Thamnophilidae son los grupos con mayor números de aves infectadas. En conclusión, el protocolo de precipitación de sales (Salting out) estandarizado es eficiente para la detección de malaria aviar convirtiéndose en una valiosa herramienta en el campo para la rápida detección y expansión de la investigación de estos hemoparásitos.