Positividad de la detección molecular de malaria usando muestras de saliva humana en la región Loreto

Abstract

The microscopic and molecular diagnoses of malaria require the extraction of blood samples, which generates difficulties and rejection of this procedure in the vulnerable population to this parasitosis. In this sense, it was proposed to determine the assessability of the molecular diagnosis of malaria using human saliva samples and to compare the sensitivity and specificity with the gold standard based on PCR of blood samples. Sixty-five blood and saliva samples were collected from patients with vivax malaria, falciparum malaria and negatives, from the communities of Zungarococha (n=11), Nina Rumi (n=17), Llanchama (n=28) and Puerto Almendra (n =9), located in the southern of Iquitos, Perú. DNA from both types of samples was purified and analyzed using standard methods. Subsequently, three DNA amplification protocols based on the polymerase chain reaction (PCR) were used to perform the molecular diagnosis: PCR-Rubio, PCR-Snounou and PCR-Cytb. The assessability of the different PCR tests using saliva was 16.92%, 18.46% and 9.23%, respectively. In addition, the sensitivity and specificity of the tests were 28.95% and 100%; 31.57% and 100%; 15.79% and 100%, for P. vivax infections, while no assay detected P. falciparum DNA. In conclusion, with the protocols used, the saliva samples are not appropriate for the molecular diagnosis of malaria since the detection of parasite DNA and the sensitivity were very low (<19% and <32%, respectively), being necessary make improvements to the protocols.

Los diagnósticos, microscópico y molecular de malaria requieren la extracción de muestras de sangre, generando dificultades y rechazo de este procedimiento en la población vulnerable a esta parasitosis. En ese sentido, se planteó determinar la positividad del diagnóstico molecular de malaria usando muestras de saliva humana y comparar su sensibilidad y especificidad con el patrón de oro que se basa en la RCP de muestras de sangre. Se recolectaron 65 muestras de sangre y saliva de pacientes con malaria vivax, malaria falciparum y negativos, provenientes de las comunidades de Zungarococha (n=11), Nina Rumi (n=17), Llanchama (n=28) y Puerto Almendra (n=9), ubicados en la ciudad de Iquitos, distrito de San Juan, provincia de Maynas, departamento de Loreto. Se purifico y analizó el ADN de ambos tipos de muestras empleando métodos estándares. Posteriormente, para realizar el diagnóstico molecular, se emplearon tres protocolos de amplificación de ADN basados en la reacción en cadena de la polimerasa (RCP): RCP de Rubio, RCP de Snounou y RCP de Cytb. Se observó que la positividad de los diferentes ensayos de RCP usando saliva fue de 16,92%, 18,46% y 9,23%, respectivamente. Además, los valores de sensibilidad y especificidad de los ensayos fueron de 28.95% y 100%; 31.57% y 100%; 15.79% y 100%, respectivamente para infecciones por P. vivax, mientras que ningún ensayo detectó ADN de P. falciparum. En conclusión, con los protocolos empleados, las muestras de saliva no son apropiadas para el diagnóstico molecular de malaria toda vez que la detección de ADN del parásito y la sensibilidad fueron muy bajas (<19% y <32%, respectivamente), siendo necesarios realizar mejoras en los protocolos.