Evaluación del gen (3-actina en Arapaima gigas "paiche" como control interno de PCR en tiempo real (qPCR)

Abstract

La identificación del gen 6-actina en Arapaima gigas "paiche" y su posterior evaluación como control interno de PCR en tiempo real (qPCR) se realizó utilizando la técnica de PCR convencional y PCR en tiempo real (qPCR) respectivamente. Se identificó el gen 6-actina en A. gigas "paiche" a partir de tejido hepático; el fragmento hallado corresponde a un sitio conservado de unión a ATP; asimismo la evaluación de éste gen por qPCR demuestra que los niveles de expresión varían de acuerdo al tiempo en muestras control (de 16,5 copias/p1 a 0,5 copias/p1 a las O y 12 horas respectivamente) y en muestras inducidas con lipopolisacáridos (LPS) también se observa variación en los niveles de expresión (5,36; 20,5; y 0,49 copias/pi a las 2, 12 y 24 horas post inducción respectivamente). A partir de lo evaluado se concluye que el gen 6-actina en A. gigas "paiche" no posee una expresión constante en condiciones normales y frente a una inducción con LPS en cultivos in vitro de células sanguíneas, por lo cual no se recomienda su uso como control interno de qPCR.