Efecto de la temperatura y el tiempo de almacenamiento de ovarios de alpacas sobre la tasa de maduración y división in vitro de ovocitos post fecundación

Abstract

Evalúa el efecto de la temperatura (12-15ºC y 22-25ºC) y el tiempo de almacenamiento (0 horas y 16 horas) de ovarios de alpacas sobre la tasa de maduración y división post fecundación In vitro. Los ovarios fueron recolectados inmediatamente después del sacrificio de los animales y colocados en solución salina 0.9%, suplementada con antibiótico-antimicótico, a una temperatura inicial de 35 ºC, para ser transportados hasta el laboratorio en un periodo de 8 horas. Los ovarios fueron distribuidos al azar en los tratamientos siguientes: C (Control): 0 horas; T1: 16 horas a 12-15ºC y T2: 16 horas a 22-25ºC. Cumplidos los tiempos de almacenamiento, los ovocitos se obtuvieron por disección (slicing), para luego proceder a su búsqueda y evaluación con la ayuda de un estereomicrocopio. Solo ovocitos con una o más capas de cúmulos fueron utilizados y madurados en medio de maduración TCM 199 suplementado con 10% de FCS, FSH, hCG, estradiol, piruvato y gentamicina, por 40 horas, bajo condiciones de 39°C con 5%CO2 y humedad alta. Al cumplirse el tiempo de maduración los ovocitos del Experimento 1 fueron colocados en solución PBS suplementada con hialuronidasa 300 UI/mg y PVP-40 para luego fijarlos en etanol: ácido acético 3:1, durante al menos 36 h, y teñirlos con Orceina y evaluar el estadío de maduración nuclear. Los ovocitos madurados del Experimento 2 fueron co-cultivados con espermatozoides obtenidos de epidídimos, seleccionados con una gradiente de Percoll, por 18 horas. Los presuntos cigotos fueron colocados en medio de cultivo KSOM hasta las 72h post fecundación In vitro, y posteriormente transferidos a medio SOF hasta los 7 días post fecundación In vitro. Los resultados señalan una tasa de maduración nuclear en metafase II de 47.9%, 12.2% y 32.7%; una tasa de división de 46.2%, 8.1% y 32.7%; y una tasa de blastocistos de 33.3%, 14.2% y 20.6% para los Tratamientos C, T1 y T2, respectivamente (p<0.05 excepto entre la tasa de blastocistos del T1 y T2). Estos resultados sugieren que almacenar los ovarios de alpaca, a una temperatura de 22-25ºC por 16h (T2), permite mantener la calidad de los ovocitos y obtener una mayor tasa de maduración y de división post fecundación In vitro, respecto a mantener los ovarios a 12-15°C por 16h (T1). Además, los resultados demuestran una mejor tasa de maduración, de división y de blastocistos post fecundación In vitro a las 0 h de almacenamiento (Control), en comparación con 16 h de almacenamiento (T1 y T2) de ovarios.