Detección de citoquinas inductora y efectora para la diferenciación y función de linfocitos colaboradores 17 (Th17) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna pacos)

Abstract

Determina y compara los niveles relativos de ARN mensajero (ARNm) de citoquinas que estimulan y efectúan respuesta tipo Th17 en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna pacos) sanas y enfermas con enteropatías de uno hasta los 45 días de edad. Se muestrearon 66 animales: 35 sanos y 31 enfermos, se tomaron dos cm. de porción media del yeyuno. Una parte de las muestras fueron conservadas a -196°C; y la otra fue embebida en formaldehído tamponado 10%. Se realizó extracción del ARN total de las muestras conservadas a -196°C; y posteriormente se sintetizó ADN complementario (ADNc). Se diseñaron oligonucleótidos a partir de secuencias de bovino (Bos taurus) para determinar expresión del factor de crecimiento transformante-β (TGF-β) e interleuquina 17 (IL-17). Se realizó medición de expresión relativa del ARNm de ambas citoquinas mediante RT-PCR tiempo real. Los valores de expresión fueron normalizados con ARNm del gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH); y los cálculos de expresión relativa se realizaron mediante el método 2-∆∆Ct. Se obtuvieron cortes histológicos de las muestras de animales enfermos para realizar el diagnóstico histológico con tinción Hematoxilina y Eosina (H: E). Los resultados mostraron que RT-PCR tiempo real mide específicamente la expresión del TGF-β e IL-17 en mucosa intestinal de crías de alpaca a partir de un día de edad. Además, durante una enteritis aguda, la producción de ARNm de IL-17 es estimulada como otro mecanismo del sistema inmune contra microorganismos patógenos como bacterias y parásitos, alcanzando niveles de expresión de hasta 1295.05 ± 161.42 veces lo observado al primer día de edad, existiendo diferencia estadística entre crías de alpacas sanas y enfermas con enteropatía (p<0.05). Se determinó que la enteritis necrótica difusa aguda asociada a bacterias presentaba los mayores niveles de expresión de IL-17. Por lo tanto, se concluye que existe respuesta tipo Th17 en mucosa intestinal de crías de alpaca sanas y enfermas con enteropatía de uno a 45 días de edad.