Obtenção de matriz extracelular descelularizada de córtex ovariano bovino e sua caracterização

Abstract

O estudo buscou otimizar a obtenção de matriz extracelular descelularizada (dMEC) a partir de tecido ovariano bovino. Diferentes concentrações de SDS e NaOH foram testadas com diferentes tempos de incubação. A descelularização foi confirmada por análise histológica e eletroforese, mostrando conservação das fibras colágenas. A menor concentração de SDS sem DNA remanescente foi de 0,1% com 24 horas e 12 horas de incubação. A quantificação de DNA resultou em ˂0,2 ng DNA/mg de tecido. O dMEC (obtido com SDS 0,1% e NaOH 0,02M por 12h) mostrou-se não tóxico para células ovarianas humanas durante 72h de cultivo in vitro. A análise proteômica identificou 155 proteínas na matriz nativa e 145 no dMEC. Após a descelularização, apenas 10 proteínas foram perdidas do matrissomo, nenhuma relacionada aos processos biológicos reprodutivos. O colágeno tipo VI alfa 3 e o proteoglicano 2 de heparan sulfato foram os componentes mais abundantes da MEC. As análises de bioinformática revelaram funções associadas a 12 processos biológicos, 19 componentes celulares e 13 funções moleculares em ambas as matrizes. Estes resultados contribuem para a compreensão das funções das proteínas nos processos ovarianos e podem ser fundamentais para o desenvolvimento de um ovário artificial transplantável.

El estudio buscó optimizar la obtención de una matriz extracelular descelularizada (dMEC) del tejido ovárico bovino. Se probaron diferentes concentraciones de SDS y NaOH con distintos tiempos de incubación. La descelularización se confirmó mediante análisis histológico y electroforesis, mostrando conservación de las fibras de colágeno. La menor concentración de SDS sin ADN remanente fue 0,1% con 24h y 12h de incubación. La cuantificación de ADN resultó en ˂ 0.2 ng DNA/mg de tejido. La dMEC (obtenida con 0,1% SDS y 0,02M NaOH por 12h) demostró no ser tóxica para células ováricas humanas durante 72h de cultivo in vitro. El análisis proteómico identificó 155 proteínas en la matriz nativa y 145 en la dMEC. Después de la descelularización, solo se perdieron 10 proteínas del matrisome, sin ninguna relacionada con procesos biológicos reproductivos. Colágeno tipo VI alfa 3 y proteoglicano de sulfato de heparano 2 fueron los componentes más abundantes de la MEC. Los análisis bioinformáticos revelaron funciones asociadas a 12 procesos biológicos, 19 componentes celulares y 13 funciones moleculares en ambas matrices. Estos resultados contribuyen al entendimiento de las funciones de las proteínas en procesos ováricos y podrían ser fundamentales para el desarrollo de un ovario artificial trasplantable.