Implementacion del sistema CRISPR/CAS9 para la mutagenesis dirigida de receptores del virus del síndrome de la mancha blanca en espermatidas del lamgostino Litopenaeus vannamei

Abstract

La producción de langostinos Litopenaeus vannamei es usualmente afectado por el virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV). Su prevención a través del mejoramiento genético es la estrategia más conveniente pero demasiado laboriosa. Por ello, se ha propuesto implementar la tecnología de edición genómica CRISPR/Cas9 para inducir mutaciones sobre receptores virales como alternativa para seleccionar langostinos resistentes al WSSV. El gen receptor seleccionado LvRab7 fue parcialmente caracterizado. Se diseñó un sgRNA y se adquirió el plásmido correspondiente. Se estableció la base de un protocolo de transfección in vivo de espermátidas y de detección de mutaciones inducidas basado en la secuenciación profunda de amplicones del gen objetivo a partir de ADN de espermatozoides. El análisis de datos NGS no son concluyentes, pero revelaron indicios de modificación genética en algunas muestras. Además, se detectó mayor variabilidad en un segmento del gen LvRab7 en langostinos resistentes F0 de un programa de mejoramiento genético en comparación a langostinos no resistentes.