Dise?o de una t?cnica de amplificaci?n isot?rmica mediada por horquillas (LAMP) en el gen AMA-1 para la detecci?n de Plasmodium vivax

Abstract

El diagnostico r?pido y preciso de la malaria es fundamental en el tratamiento y su control de la enfermedad. Las pruebas diagn?sticas basadas en la identificaci?n del par?sito mediante microscop?a ?ptica no pueden detectar de manera confiable las infecciones de baja densidad parasitaria y los m?todos moleculares si bien son muy sensibles se mantienen demasiado complejos para su implementaci?n en campo. Por ello, la t?cnica LAMP (de las siglas en ingl?s: Loop Mediated Isothermal Amplification) es una de las t?cnicas moleculares m?s utilizadas en el diagn?stico de enfermedades infecciosas gracias a su capacidad isot?rmica, alta sensibilidad, preparaci?n de reactivos simple y f?cil lectura de resultados. El presente trabajo de investigaci?n tuvo como finalidad el optimizar un m?todo detecci?n r?pida, espec?fica y sensible de Plasmodium vivax mediante la t?cnica de amplificaci?n isot?rmica mediada por horquillas para lo cual se dise?aron cebadores que amplifiquen una secuencia especifica del gen ama -1 de Plasmodium vivax. Para ello, se clon? el producto de amplificaci?n para la obtenci?n de ADN plasm?dico el cual fue usado como control est?ndar de amplificaci?n en los ensayos de optimizaci?n de las condiciones de amplificaci?n y la determinaci?n del l?mite de detecci?n de la t?cnica. La especificidad de la t?cnica se realiz? con muestras de ADN causantes de malaria en humanos - Plasmodium falciparum, P. malariae y P. ovale-. Finalmente, se realiz? la evaluaci?n de muestras previamente diagnosticadas por el m?todo de rutina y t?cnicas moleculares para P. vivax en donde se comprob? la efectividad del ensayo. Los resultados obtenidos confirmaron que la t?cnica LAMP tiene como l?mite de detecci?n 4 par?sitos/?L en el cual se obtuvieron resultados f?cilmente interpretables en una hora de incubaci?n. Gracias a estas caracter?sticas, esta t?cnica podr?a ser implementada en zonas end?micas rurales donde hay diferentes factores que limitan la implementaci?n de equipos sofisticados para un diagn?stico r?pido y sensible de la malaria.