Expresión de la proteína mayor de cápside VP1 de sapovirus GII mediante el sistema de escherichia coli

Abstract

El trabajo de investigación se realizó en el Laboratorio Virología Molecular de los Laboratorios de Investigación y Desarrollo de la Universidad Peruana Cayetano Heredia de Lima, durante los meses de mayo a octubre del 2017. El objetivo principal del estudio fue expresar la proteína mayor de cápside VP1 del genotipo II.4 de sapovirus, uno de los genogrupos más predominantes, en un sistema de expresión procariótico como es Escherichia coli. La metodología empleada fue como sigue: el diseño de primers se realizó a través de programas bioinformáticos; la extracción del RNA se realizó empleando el kit de extracción viral QiAgen. El RNA fue convertido a cDNA y amplificado empleando los primer diseñados empleando la técnica de PCR convencional. Para el clonamiento del producto de amplificación se utilizó el vector pET28, la expresión de la proteína recombinante se realizó en un sistema procariota y la purificación de la proteína se efectuó mediante la cromatografía de afinidad, el cual se confirmó mediante la técnica de SDS-PAGE y Western blot empleado anticuerpos Anti-His. Se diseñaron los primers forward 5’CCGGAATTCATGGAGGGCAATGCTCGC3’ y el primer reverso 5’CCCAAGCTTTTATTCAAGAAACCTGACGGC3’. La amplificación mediante PCR resulto en una sola banda de1680 pares de bases. Se consiguió clonar el gen VP1 en el vector pET28 sin la alteración del marco de lectura, y se logró expresar la proteína recombinante VP1 en E. coli cepa Rossetta. La proteína recombinante tuvo un tamaño aproximado de 60KDa mediante SDS-PAGE y western blot. En conclusión, se logró expresar la proteína recombinante mayor de cápside de sapovirus del genotipo GII.4 de sapovirus en el sistema de expresión procariótico de E. coli cepa Rossetta.