Determinación del balance de reguladores de crecimiento en la inducción de callos a partir de anteras de cacao (theobroma cacao l.) en los cultivares ics-95 e imc-67

Abstract

La presente investigación se realizó el Laboratorio de Micropropagación in vitro de la Facultad de Agronomía de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS), distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Huánuco, región Andrés Avelino Cáceres; con la finalidad de determinar el balance de reguladores de crecimiento para la obtención in vitro de callos a partir de anteras de cacao (Theobroma cacao L.) en los cultivares ICS-95 e IMC-67. Se utilizaron los estambres obtenidos de los botones florales cerrados de dos cultivares de cacao (ICS-95 e IMC-67), colectados en Noviembre del 2012 en el Banco de Germoplasma de Cacao de la UNAS. Los tratamientos experimentales consistieron en la interacción de dos factores A y B, siendo el primero, pre-tratamientos con frio y el segundo la combinación de hormonas, utilizándose el DCA con arreglo factorial 3A5B con 10 repeticiones y la prueba de Duncan (α = 0.05). Se colectaron 30 flores inmaduras en estado de botón floral por cada cultivar de cacao entre las 8:00 y 9:00 de la mañana, con el fin de evitar la apertura de los botones, después de aislados del árbol. Seguidamente los botones fueron colocados en un recipiente estéril y llevados al laboratorio, donde se utilizaron dos tipos de medio de cultivo, para los pre-tratamientos el medio MS/2 líquido y para los ensayos con balance hormonal, el MS/2 semisólido. Los medios de cultivo se ajustaron a un pH de 5.7, antes de ser autoclavados. Los botones florales fueron desinfectados en cámara de flujo laminar, con alcohol al 70% por 1 minuto e hipoclorito de sodio al 1% más tres gotas de Tween 20, durante 5 minutos. Se guardaron cinco botones florales por placa Petri con el medio MS/2 líquido, obteniendo 4 placas Petri que fueron sometidas a los pretratamientos. Transcurrido el tiempo de los pre-tratamientos, los botones florales fueron seccionados con un bisturí estéril y los sépalos fueron separados para extraer la concha petaloide y obtener los estambres con mayor facilidad. Los estambres, se sembraron en tubos de ensayo que contenía el medio MS/2 semisólido con el balance hormonal correspondiente a cada tratamiento, que consistió de 10 tubos de ensayo con 1 antera cada uno, mantenidos en oscuridad a 25ºC y evaluados semanalmente hasta la expresión de la callogénesis con estructuras proembrionarias. Las evaluaciones se realizaron durante 23 semanas por separado en ambos cultivares cacao. Se evaluó tiempo y porcentaje de aparición de callos, crecimiento del callo, tipo de aparición de callos, contaminación bacteriana y fúngica, necrosamiento, presencia de organogénesis y albinismo. El mejor regulador de crecimiento fue el T4 (15 ppm de 2,4-D, 3 ppm de AIA y 5 ppm de ANA) con 10 callos, seguido del T3 (10 ppm de 2,4-D, 3 ppm de AIA y 5 ppm de ANA) con 8 callos y por último el T0 (0 ppm de AIA y 0 ppm de ANA) con 5 callos, correspondientes al cultivar IMC-67. Las respuestas más altas en la formación de callos embriogénicos en las anteras de ambos cultivares se consiguió con el primer pre-tratamiento a1 (sin frío por ninguna semana) y con una combinación de hormonas b5 (15 ppm de 2,4-D, 3 ppm de AIA y 5 ppm de ANA). En ambos cultivares se encontraron diferencias en la obtención de callos a partir de las anteras. Los valores más bajos se observaron en ICS-95 con 22 callos y los más altos en IMC-67 con 38 callos. En la obtención de callos embriogénicos, se observaron valores de 5 en ICS-95 y 11 en IMC-67. La pérdida de explantes por necrosamiento fue mayor en ICS-95 (18 explantes necrosados) y menor en IMC-67 (16 explantes necrosados). La contaminación por bacterias del ICS-95 (3 explantes con bacterias) fue más bajo que en IMC-67 (5 explantes con bacteria). De los factores estudiados, los más importantes fueron: genotipo, pretratamiento, combinación de hormonas con diferentes niveles de 2,4-D.