Determinación de Acido Caféico, Evaluación de la Actividad Antioxidante y Contenido Polifenólico en Brácteas Secas de Cynara Scolymus l. (Alcachofa), Arequipa - 2013

Abstract

RESUMEN

En el presente trabajo de investigación, se utilizaron las brácteas de desecho de Cynara scolymus L (alcachofa), recolectadas de la empresa ALSUR. S.A.C. (Arequipa); evaluando el contenido de ácido caféico (AC) mediante cromatografía líquida de alta performance (HPLC), actividad antioxidante medida como porcentaje de inhibición (% I) mediante el método de DPPH; y contenido polifenólico en miligramos de Equivalentes de Ácido Gálico por litro (mg EAG/L) por el método de Folin Ciocalteu.

Las brácteas de desecho de Cynara scolymus L fueron secadas, pulverizadas y tamizadas obteniendo una fracción de partículas <50 µm y otra entre 50-350 µm. Se realizaron dos tratamientos de extracción: maceración y extracción por Soxhlet independientemente. El primero, la maceración, fue realizado a velocidad constante y temperatura ambiente empleando el tamizado <50 µm bajo una agitación de 2 y 6 hrs, respectivamente; y el tamizado de 50-350 µm, bajo una agitación de 2 y 6 hrs. El segundo tipo de tratamiento, extracción en Soxhlet, empleó la fracción de tamizado <50 µm por un tiempo de 16 hrs, completando 25 ciclos. Todos los tratamientos se realizaron por duplicado y emplearon 10g de muestra en 50 mL de metanol (20% p/v) cada una, finalizado el proceso extractivo se filtró y concentró para luego ser almacenadas bajo refrigeración hasta su posterior uso. Para de determinación de AC, se aplicó una extracción en fase sólida (SPE) la cual empleó silica gel contenida en el cartucho de SPE acondicionado con diclorometano; el extracto colocado en el cartucho fue enjuagado con acetato de etilo y eluído con metanol. Los extractos fueron identificados y cuantificados mediante HPLC, empleando para ello dos columnas monolíticas acopladas, una precolumna Chromolith RP-18e de 5x4.6 mm y una columna Chromolith RP18e de 100 mm x 4.6mm, 2µm; la detección se llevó a cabo a una longitud de onda de 300 nm usando como fase móvil una mezcla de Acetonitrilo(A) y solución buffer de ácido acético (B) (pH 2.8) para la gradiente. Dicho análisis por HPLC permitió cuantificar 21.23ppm AC/g y 59.19 ppm AC/g extraído en la fracción de partículas <50 um maceradas y agitadas por 2 y 6 horas respectivamente; por su parte se identificó que el tratamiento Soxhlet fue el mejor método de extracción de AC respecto a los macerados bajo agitación puesto que consiguió extraer 116.71 ppm AC/g. Para analizar el porcentaje de inhibición (%I) del radical DPPH, se realizaron las mediciones en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 517 nm, empleando una solución de DPPH (2.1 mM) frente a una solución de Trolox(0.005-0.04mmol/L). El porcentaje de inhibición para los macerados bajo agitación fueron: para el tamizado <50 µm, 33.39 %I y 20.66 %I bajo 2 y 6 hrs de agitación respectivamente; para el tamizado entre 50-350 µm resultó 32.28 %I y 26.93 %I bajo 2 y 6 hrs de agitación respectivamente y para la muestra en Soxhlet resultó 13.22% I del radical DPPH. Los resultados fueron estadísticamente diferentes (p=0.0016) y muestran que se conserva mejor las propiedades antioxidantes si no se somete la muestra aun estrés mecánico ni térmico.

La determinación de fenoles totales por el método de Folin-Ciocalteu fue realizada en espectrofotómetro a una longitud de onda de 715 nm. En los macerados el tamizado <50 µm resultó en 6.81 y 7.34 mg EAG/L bajo 2 y 6 hrs de agitación respectivamente, en el tamizado entre 50-350 µm resultó 5.6 y 5.89 mg EAG/L bajo 2 y 6 hrs de agitación respectivamente, y para la muestra de Soxhlet con el tamizado <50 µm se obtuvo 7.3216±0.87 mg EAG/L. No se observaron diferencias estadísticamente significativas (p=0.1411), denotando que el contenido polifenólico se conserva independientemente del tipo de tratamiento utilizado. Finalmente, los máximos valores encontrados de ácido caféico, actividad antioxidante y fenoles totales en las brácteas secas de alcachofa fueron 116.71±5.16 ppm AC/g, 33.39±3.04 %I del radical DPPH y 7.3216±0.87 mg EAG/L respectivamente, dichos valores son comparables a los encontrados en vegetales usados en industria alimentaria y biotecnológica por lo tanto se puede sugerir a las brácteas de alcachofa como una alternativa óptima de materia prima para su transformación en productos de valor agregado en dichas industrias.

Palabras clave: Cynara scolymus L, Ácido caféico, antioxidantes, polifenoles.