Extracción de Acetogeninas de las Hojas de Annona Muricata y su Efecto Apoptotico en Células de Cáncer de Próstata Humano PC-3

Abstract

Se utilizaron hojas de guanábana (Annona muricata) obtenidas por medio de una empresa distribuidora la cual tenía las siguientes características: Hojas tomadas de huertos establecidos en la zona agroindustrial del Valle del Cauca, (Colombia), sector rural del municipio de Pradera, Agrícola Varahonda, Finca la Española, localizada a 1070 msnm. A 23°C de temperatura promedio, 1225 mm de precipitación promedio anual, y humedad relativa promedio de 83%. Las hojas fueron colectadas en igual grado de madurez, correspondiente a 16 semanas luego de la formación del “erizo” y el mismo día transportadas en contenedores de poliestireno expandido (tecnopor), hasta los laboratorios del MCPHS University llegando el material vegetal vía aérea. Para poder evaluar la actividad citotóxica de los extractos obtenidos a partir de la planta, se cultivaron células de cáncer de próstata PC-3 en medio F-12K (suplementado con 10% de FBS y 1% de penicilina y estreptomicina) incubándose a 37 ° C con 5% de CO2. Para la interpretación de los resultados el control negativo para todos los ensayos fue representado por medio F-12K no tratado que contenía DMSO al 0,1% como vehículo. La respuesta de las células a los extractos se midió por medio de ensayos de viabilidad celular (MTS), en los cuales se evaluó que tan dañinos resultaban ser los extractos a las células PC-3. Las células fueron tratadas con diferentes concentraciones, y diluidas en agua ultra pura. Se sembraron concentraciones de 2 x 104 de células en placas de 96 pocillos y se dejaron incubar durante 24 horas con medio F-12K. Luego de procesos de extracción cromatografica realizada por medio de columnas de fraccionamiento, TLC y TLC preparativa se identificó una acetogenina (ACG), para dilucidar su estructura química se usó resonancia magnética nuclear (RMN) además, ensayos de luminiscencia también fueron realizados para determinar la actividad de las Caspasas efectoras -3//7 en las células luego de varias horas de tratamiento con el extracto de Annona muricata con el objetivo de determinar indicios de apoptosis en las células. Los ensayos de MTS revelaron una citotoxicidad que causó una disminución de más del 80% de células PC-3 a una concentración de 30 µg/mL luego de 24 horas, el tratamiento con la fracción 1 de la TLC preparativa demostró una disminución del 90% de células cancerosas a una concentración de 10 µg/mL luego de el mismo periodo de tiempo. La actividad de las caspasas -3/7 aumentó dos veces más que el grupo control al momento de usar el extracto a una concentración de 10 µg/mL a las 12 horas del tratamiento a su vez, los picos encontrados en los ensayos de Resonancia magnética nuclear son similares a la ACG llamada “Rolledecin C” hallada por Zheng-Ming Gu et al, confirmando la presencia de una ACG10. Nuestros estudios han mostrado una extracción exitosa de ACG de Annona muricata la cual ha mostrado indicios de inhibir la proliferación de células de cáncer PC-3. Luego del tratamiento que se realizó a las Caspasas -3/7 se presentó un aumento de su actividad, lo que es indicio de una muerte celular programada y de una activación de la vía mitocondrial de muerte celular. Palabras clave: Annnona muricata, Medio F-12K, Cáncer de próstata, MTS, Apoptosis, Caspasas, Resonancia Magnética Nuclear.