Validación de un método para Coliformes Totales y Escherichia coli utilizando el medio de cultivo comercial cromogénico CCA ( AGAR para Coliformes Chromocult), en quesos no madurados, 2023

Abstract

En el Laboratorio de Ensayo y Control de Calidad (LECC) de la Universidad Católica de Santa María de la ciudad de Arequipa, una de las muestras de mayor concurrencia son los quesos no madurados. El queso representa uno de los productos lácteos de mayor consumo en el Perú, por lo que su análisis es de suma relevancia. El LECC realiza análisis microbiológicos en una amplia variedad de alimentos de consumo humano, que deben cumplir con una calidad microbiológica, en el que se evalúa la inocuidad alimentaria y la calidad comercial del producto. Los quesos no madurados que tienen bastante afluencia en el laboratorio deben de someterse a este análisis de calidad, y dentro de este, se encuentra el análisis de recuento de coliformes totales y E. coli siendo el CCA (Agar para Coliformes Chromocult) uno de los medios más utilizados, sin embargo, este no se encuentra validado para esta muestra de alimento según la ISO (Organización Internacional de Normalización) y por ende tampoco se encuentra validado en el LECC de la UCSM. Es por ello que, en el presente trabajo, se evaluó a este medio de cultivo en base a la ISO 16140-4 “Protocolo para la validación de métodos alternativos (registrados) frente a los métodos de referencia”. Las muestras de quesos no madurados (fresco, lluta, mantecoso, mozzarella, ricotta y serranito) fueron obtenidos del mercado San Camilo de tres tiendas comerciales, obteniendo en total 18 quesos. El estudio fue observacional. La recolección de las muestras de quesos no madurados se realizó en el mes de Julio del 2023. Los datos recolectados se almacenaron en Microsoft Excel para realizar la estadística correspondiente. La recuperación relativa de coliformes totales y E. coli en CCA en comparación con TSA (Agar Triptona Soja) fue aceptable (101 % y 96 %), la desviación estándar interna de repetibilidad (0,00266 y 0,00287) y reproducibilidad (0,14870 y 0,17401) fueron suficientes. El rango de trabajo se estableció entre 10 - 150 UFC (Unidades Formadoras de Colonias) por placa según la ISO 4832. En el parámetro de precisión se obtuvo como desviación estándar de repetibilidad, para el método de coliformes totales de referencia fue 0,084 y para el alternativo 0,058, en el caso de la determinación de E. coli se obtuvo una desviación estándar de repetibilidad para el método de referencia de 0,076 y para el alternativo de 0,095, estos resultados se encuentran dentro del rango de los límites de aceptabilidad (AL) y además se calcularon los intervalos de tolerancia esperados (β-ETI) que cumplen con la condicional Upper β-ETI ≤ AL y Lower β-ETI ≥ -AL, por lo tanto el método alternativo es aceptado como equivalente al método de referencia. La veracidad relativa se confirmó por un gráfico de dispersión que mostró la distribución alrededor de la línea diagonal, indicando que si vi existe concordancia entre los resultados de ambos métodos. Así mismo, se realizó el método de Bland-Altman que consiste en comparar dos métodos diferentes y analizar su concordancia en base a una misma variable, en el caso de coliformes totales y E. coli se obtuvo un límite superior (0.20715 y 0.24126) y un límite inferior (-0.02903 y -0.08165), donde la mayoría de los datos obtenidos se encuentran dentro de los límites y cumple con lo establecido por el parámetro. En conclusión, el método para el recuento de coliformes totales y E. coli utilizando el medio de cultivo comercial cromogénico CCA, demostró ser útil para la cuantificación simultánea de ambos microorganismos en quesos no madurados, y por lo tanto puede ser validado para este método (52).