Aislamiento y cultivo de células del quiste radicular inflamatorio y expresión del Gen P53

Abstract

El quiste radicular inflamatorio es considerado como una de las lesiones odontogénicas más frecuentes dentro del campo odontológico, presentando sus características clínicas y radiográficas particulares. En la histopatología encontramos gran cantidad de fibroblastos de los cuales, presentan cúmulos de colonias celulares. El objetivo de esta investigación es el aislamiento y cultivo de células madre del quiste radicular inflamatorio, para su caracterización a un nivel morfológico y molecular. Esta investigación partió desde la hipótesis de saber si las células madre del quiste radicular inflamatorio presentan alteración en su ADN y en la búsqueda de la presencia de la sobre expresión de P53. Los protocolos de aislamiento en el transcurso de la investigación tuvo modificaciones por la necesidad de la búsqueda del mejor método de cultivo, esto permitió su comparación con otros. En la metodología se usó un protocolo modificado que se extrajo de la modificación de varios protocolos para obtener el más apropiado para el aislamiento de nuestras células madre junto con la técnica de viabilidad celular. La expresión de p53 se evaluó por inmunofluorescencia y para la búsqueda de mutaciones se utilizó el software IGV. Las células madre de quiste son células alargadas, planas, de apariencia fibroblástica, sobre expresan la proteína p53 y presentan mutaciones que por primera vez se reportan en esta tesis. El protocolo modificado evidencia una buena viabilidad celular al momento de aislar células madre. Las mutaciones se encontraron en posiciones específicas la presencia de mutación en la secuencia del exón 1 chr 17: 7675089 (GrCh38) de variante missense en los alelos de G > C y con 7 mutaciones en el exón 4 en el chr 17: 7673787 con alelo G > A, el chr 17: 7673782 con alelo T > C, chr 17: 7673780 con alelo T > A y chr 17: 7673743 con alelo C > T, chr 17: 7673783 con alelo C > G y el chr 17: 7673780 con el alelo T > C y chr 17: 7673786 con alelo G > A, estas 3 últimas mutaciones, no se encuentran mencionadas en la literatura, lo que indica que por primera vez reportamos este tipo de mutación para p53 Se puede determinar un aislamiento de células madre del quiste radicular inflamatorio por medio de un protocolo modificado o adaptado a nuestras necesidades de cultivo. También a través de un análisis de la viabilidad celular, la eficacia del método, descripción morfológica de las colonias de células fibroblásticas, la presencia de p53 en el núcleo como en el citoplasma y las mutaciones de p53 a nivel del exón 1 y 4.