Análisis de proliferación y diferenciación celular en organoides de colon murino expuestas al medio condicionado L-WRN y evaluación de la expresión del receptor de tiamina (THR1)

Abstract

En los últimos años, los organoides han sido considerados como una de las innovaciones revolucionarias del mundo científico, ya que se trata de un gran avance en la investigación biológica y biomédica moderna. El desarrollo del modelo organoide pretende simular la fisiología y procesos bioquímicos de un ser vivo desde una perspectiva molecular hasta un enfoque celular, tisular y orgánico, razón por la cual son denominados como “mini-órganos”. Los organoides intestinales cobran gran importancia en estudios bioquímicos y farmacológicos, debido a que son considerados como modelos 3D que permitirían la evaluación de la eficacia y seguridad de compuestos. El presente estudio pretende lograr la conformación del cultivo organoide de colon expuestas al medio condicionado L-WRN y despliega el análisis de proliferación y diferenciación celular de células madre adultas haciendo uso de biomarcadores de proliferación (Ki67) y de células madre (LGR5); además de la evaluación de la expresión del receptor de tiamina 1 (THR1). La obtención de organoides surgió a partir del aislamiento de criptas intestinales de colon murino C57BL/6J sometidas a un cultivo 3D. Paralelamente, se cultivó otra línea celular denominada “LWRN” que nos permite la obtención del medio condicionado L-WRN, el cual permitió el cultivo de células madre presentes en los organoides. El análisis de la expresión genética de MKi67, LGR5 y SLC19A2a a partir de ARNm haciendo uso de PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR) permitió identificar el lote de medio condicionado L-WRN más adecuado para el ensayo. El biomarcador de proliferación Ki67 tuvo gran expresión relativa en el lote 1 con respecto al lote 3, con una diferencia significativa de 0.8255 (P ˂ 0.05, IC 95%); así también como la expresión del biomarcador de células madre LGR5 fue favorecida por lote Ancient, siendo la diferencia significativa más alta con respecto al lote 3, dando por resultado 0.9745 (P ˂ 0.05, IC 95%). La expresión del gen SLC19A2 para el receptor de tiamina 1 (THR1) estuvo presente en los cuatro grupos de estudio y en mayor proporción en el último lote de medio condicionado L-WRN, el cual obtuvo la diferencia significativa más considerable con respecto al lote Ancient, con un valor numérico de -1.794 (P ˂ 0.05, IC 95%).