Title: Identificación de los Polimorfismos de Nucleótido Único (SNP’S), del Citocromo P450, CYP2C9*2 Y CYP2C19*2 Y *3, en Pacientes Epilépticos
OCDE field: https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#2.09.00
Issue Date: 12-Nov-2018
Institution: Universidad Católica de Santa María
Abstract: Los polimorfismos de nucleótido único (SNPs) constituyen una herramienta importante
en la biotecnología y en especial en la biotecnología médica, particularmente en el
estudio de la medicina personalizada. La variabilidad entre individuos en la respuesta a
fármacos, es un grave problema en la práctica clínica y su desarrollo, pudiendo conducir
a un fracaso terapéutico o efectos adversos. El citocromo P450 con su subfamilia
CYP2C, relacionada al metabolismo de fármacos, se ha vinculado a la resistencia frente
al tratamiento de la epilepsia, por lo que el objetivo del presente trabajo fue identificar
y reportar polimorfismos de nucleótido único (SNPs), así como la frecuencia alélica en
una población representativa de personas tanto con padecimiento de la enfermedad; como
sanas, permitiendo conocer el estado polimórfico para poder así contribuir con el éxito del
tratamiento; para esto, 80 pacientes epilépticos, entre los 15 y 80 años de edad, atendidos
por consulta externa en el servicio de Neurología del Hospital Regional Honorio
Delgado Espinoza de Arequipa fueron reclutados, además se incluyó un grupo control
con 80 voluntarios no relacionados a la enfermedad, las muestras fueron procesadas en
el Laboratorio de Biología Molecular y Farmacología Experimental de la Universidad
Católica de Santa María, donde se analizó la genotipificación de CYP2C9 y CYP2C19,
para lo cual se realizó la extracción de ADN genómico de células sanguíneas empleando
el método de columnas de silica, la evaluación del producto de extracción comprendió
de su cuantificación por fluorometría, donde se obtuvo en promedio 37.86 ng/μL de ADN
genómico, para las muestras de pacientes epilépticos, y un promedio de 45.03 ng/μL para las
muestras de voluntarios control, la calidad del ADN genómico se evaluó por espectrofotometría
con la relación A260:A280 nm, donde se obtuvo para los pacientes epilépticos una relación
promedio de 1.85, y para voluntarios control el promedio de esta misma relación fue de 1.86,
finalmente la integridad del ADN genómico extraído se evidenció a través de la
evaluación electroforética, cumpliendo de manera óptima con las condiciones para el
análisis molecular; a su vez la identificación de polimorfismos se analizó mediante la
amplificación de la secuencia de interés y su posterior digestión con las enzimas de
restricción Sau96I (CYP2C9*2), SmaI (CYP2C19*2), y BamHI CYP2C19*3), este
procedimiento en dos pasos comprende la técnica de PCR-RFLP que tras el análisis de
todas las muestras se pudo concluir que la presencia de las variantes polimórficas en los
genotipos y alelos pertenecientes a CYP2C9*2, CYP2C19*2 y CYP2C19*3, de pacientes
epilépticos frente a los voluntarios control no presentan diferencia significativa, como tampoco
la manifiesta una comparación intergrupal en cuanto a pacientes epilépticos
farmacorresistentes y farmacorrespondedores, sin embargo se observó un efecto protector ante
la presencia polimórfica de CYP2C9 y CYP2C19, que a pesar de no ser significativo en el
presente estudio, también fue reportado por otros, sugiriendo favorecer a no desarrollar
resistencia al tratamiento, por su parte el análisis poblacional de distribución genotípica
evaluado mediante el equilibrio de Hardy-Weinberg señaló encontrarse en equilibrio para el
grupo de voluntarios control, pero fuera de este, para el grupo de pacientes epilépticos lo que
se podría interpretar como un cambio evolutivo en la población estudiada. Finalmente en
cuanto a la relación del estado polimórfico de los genes CYP2C9*2, CYP2C19*2 y
CYP2C19*3, se identificó que sus frecuencias alélicas se encuentran dentro del rango
reportado en poblaciones Chinas, Japonesas, y Mexicanas.
Palabras clave: CYP2C9, CYP2C19, Polimorfismo de nucleótido único (SNPs), PCR-RFLP
Discipline: Ingeniería Biotecnológica
Grade or title grantor: Universidad Católica de Santa María.Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas
Grade or title: Ingeniero Biotecnólogo
Register date: 12-Nov-2018