Cuantificación de Hidroximetilfurfural (hmf) por cromatografía líquida de alta resolución (hplc) y espectrofotometría UV-visible en miel

Abstract

El Hidroximetilfurfural (HMF) es un parámetro indicador de la calidad y frescura de la miel. Los niveles de HMF en miel aumentan cuando la miel es sometida al calor, almacenada por largos periodos de tiempo o en condiciones no adecuadas y adulterada con jarabes invertidos. El Codex Alimentarius y la Comisión Internacional de la Miel (IHC) recomiendan el método espectrofotométrico basado en protocolos de White (AOAC 980.23) y el método por HPLC para la cuantificación de HMF en mieles. Por lo que el objetivo principal en el presente trabajo fue determinar los niveles de HMF por los métodos mencionados. El método espectrofotométrico se desarrolló utilizando un espectrofotómetro Shimadzu UV-1700, a una longitud de onda de 284 nm, y el método por HPLC se desarrolló utilizando un equipo de cromatografía de alta resolución Merck Hitachi con una columna R18 Merck Lichrocart, a una longitud de onda de 284 nm, con una fase móvil 90:10 de agua:metanol. Encontrándose un tiempo de retención de 3.4 minutos Los parámetros evaluados para la validación fueron: linealidad, sensibilidad, precisión y exactitud. Para la validación del método por HPLC, se realizó un gráfico de calibración en un rango de 19.97 mg/L a 99.86 mg/L con soluciones de HMF , presentando un r2=0.9999 el cual indica un alto grado de correlación, un coeficiente de variación (CV%) de 0.31% para la repetibilidad del sistema instrumental estando este resultado dentro de lo estipulado por la USP, la cual indica un CV% no mayor del 2% , un CV% de 0.06 a 0.49% para la repetibilidad del método siendo este valor aceptable según la AOAC que establece un CV% no mayor a 5.3% , un porcentaje de recuperación de 90.87% el cual se ubica dentro del rango esperado de 80-110% según la AOAC y un límite de detección (LD) de 0.46 mg/L y un límite de cuantificación (LC) de 0.73 mg/L. . Para validar el método espectrofotométrico, se realizó un gráfico de calibración en un rango de 12.24 mg/L a 195.84 mg/L con soluciones de HMF , presentando un r2= 0.9996 el cual indica un alto grado de correlación, un CV% de 1.23% para la repetibilidad del sistema instrumental estando este resultado dentro de lo estipulado por la USP, la cual indica un CV% no mayor del 2% y un CV% de 0.88 a 3.75% para la repetibilidad del método siendo este valor aceptable según la AOAC que estable un CV% no mayor a 5.3% ,un porcentaje de recuperación de 115.70 % el cual está por encima de lo establecido por la AOAC de 80-110%, un porcentaje de recuperación por encima del 100% indican interferencias debidas a la matriz , finalmente se obtuvo un límite de detección (LD) de 0.61 mg/L y un límite de cuantificación (LC) de 1.4 mg/L. Se analizaron en total seis muestras de miel provenientes de denominadas tiendas orgánicas, mercados y supermercados de la ciudad de Arequipa. Se determinó la concentración de HMF por HPLC obteniendo un rango de concentración de 585.40 mg/kg – 1365.6 mg/kg en cuatro de las muestras, resultados por encima de los niveles permisibles por la Norma Técnica Peruana que establece un máximo de 80 mg/kg, a excepción de dos muestras con una concentración por debajo del LD y LC. En el método por Espectrofotometría UV-Visible se obtuvo un rango de concentración de HMF de 596.4 mg/kg – 1471.9 mg/kg en cuatro de las muestras, estando estos resultados por encima de los niveles permisibles, a excepción de dos muestras con una concentración de 7.4mg/kg y 19.9 mg/kg. Se realizó un análisis de varianza de dos factores para determinar si existe diferencia significativa entre estos dos métodos, obteniéndose un p<0.05 por lo que se rechaza la hipótesis nula, concluyendo así que existe diferencia significativa entre ambos métodos. PALABRAS CLAVE: Hidroximetilfurfural, Mieles, Cromatografía liquida de alta resolución, Espectrofotometría UV-Visible, Reacción de Maillard, Caramelización.