Desarrollo y Validación de un Método Bioanalítico para el Estudio Farmacocinético de Fenitoína y su Co-Administración con Inhibidores de la Glicoproteína-P en Ratas Sprague-Dawley. Arequipa, 2019.

Abstract

La Glicoproteína-P (Gp-P) limpia la célula exportando cientos xenobióticos de su interior, por lo que ha sido implicada en muchos casos de farmacorresistencia, tal es el caso de antiepilépticos como fenitoína, el cual es un fármaco de primera elección para el tratamiento de la epilepsia y, es a su vez, un sustrato de la Gp-P. Por ello la necesidad del estudio de las interacciones farmacocinéticas, tras la administración de fenitoína e inhibidores de la Gp-P. Objetivo: El presente trabajo tuvo por objetivo desarrollar y validar un método bioanalítico para el estudio farmacocinético de fenitoína y su co-administración con inhibidores de la Gp-P (elacridar y tariquidar) en ratas Sprague-Dawley. Métodos: Se desarrollaron y validaron dos métodos bioanalíticos por HPLC, uno para la cuantificación de fenitoína y otro para la cuantificación de ambos inhibidores en plasma. En el desarrollo de los experimentos de farmacocinética se utilizaron 42 ratas Sprague-Dawley agrupadas en 10 grupos. Al grupo 1 (n=6) se le administró fenitoína 15 mg/Kg de peso. Los grupos 2, 3 y 4 (n=4 c/u) recibieron fenitoína co-administrada con tariquidar en dosis de 0.5, 1 y 2 mg/Kg de peso, respectivamente. Los grupos 5, 6 y 7 (n=4 c/u) recibieron fenitoína co-administrada con elacridar en dosis de 0.5, 1 y 2 mg/Kg de peso, respectivamente. Los grupos 8, 9 y 10 (n=4 c/u) recibieron fenitoína co-administrada con elacridar-tariquidar en dosis de 0.5, 1 y 2 mg/Kg de peso de ambos, respectivamente. Los tratamientos fueron administrados por vía IV en la vena caudal y se realizó un corte en dicha vena para obtener muestras de sangre (500 μl) a los 5, 15, 30, 45, 60, 180, 360, 480, 600, 720 min post-administración. Se separaron los plasmas por centrifugación a 8000 g por 5 min, para luego ser extraídos por precipitación de proteínas usando acetonitrilo; y finalmente, ser analizados por HPLC. Resultados: El Método Fenitoína fue selectivo, lineal en el rango de 0,1 μg a 50 μg, presentó una alta sensibilidad (LC = 36.98 ng/mL, LD = 98.79 ng/mL) y una correcta precisión, reproducibilidad, exactitud y simetría de picos. La recuperación fue superior al 97% y fue estable en ciclos de congelamiento y descongelamiento, en mesa de trabajo, en muestra preparada y a largo plazo hasta por 3 meses a -20 °C. El Método Inhibidores fue lineal en el rango de 0,1 μg a 20 μg para ambos inhibidores, presentó una alta sensibilidad (LC = 36.98 ng/mL, LD = 98.79 ng/mL) y una buena precisión, reproducibilidad, exactitud y simetría de picos. Se obtuvo una recuperación superior al 93% y fueron estables en ciclos de congelamiento y descongelamiento, en mesa de trabajo, en muestra preparada y a largo plazo de hasta por 3 meses a -20 °C. Se determinó los parámetros farmacocinéticos de la administración IV de fenitoína (T1/2 α = 0.42 h, ABCt = 396.08 μg/mL min-1, Cl = 38.52 mL/min Kg-1, Vd = 1390.71 mL/Kg). Los resultados obtenidos tras la co-administración de ambos inhibidores (elacridar y tariquidar) en diferentes dosis muestran que la coadministración en dosis de 1 y 2 mg/Kg provoca un aumento significativo del ABCt de fenitoína, siendo mayores los valores obtenidos tras las co-administraciones con tariquidar y elacridar-tariquidar. El Cl disminuyó significativamente en todos los grupos que recibieron inhibidores de Gp-P en dosis de 1 y 2 mg/Kg, mientras que el Vd solo disminuyó de manera significativa tras las co-administración con tariquidar de 1 y 2 mg/kg. El T1/2 α aumento significativamente para los grupos co-administrados con elacridar 2 mg/Kg y con elacridartariquidar de 1 y 2 mg/Kg, mientras que el T1/2 β aumento significativamente en todos los grupos. Conclusiones: Los métodos bioanalíticos desarrollados y validados sirvieron para la cuantificación de fenitoína e inhibidores de la Gp-P, lo que permitió determinar que las co-administraciones de los inhibidores de la Gp-P en sus diferentes dosis modifican el perfil farmacocinético de fenitoína, aumentando su biodisponibilidad y tiempo de permanencia en el organismo. Palabras claves: Validación, método bioanalítica, fenitoína, farmacocinética, Glicoproteína-P, elacridar, tariquidar.