Title: Evaluación In Vitro del Efecto Neurotóxico Ocasionado por Plomo y Manganeso Individualmente y en Combinación, a través de un Marcador de Lesión (Ldh) y Viabilidad Celular en Neuroblastoma de Rata (Línea Celular B35).
OCDE field: https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.05
Issue Date: 13-Aug-2019
Institution: Universidad Católica de Santa María
Abstract: La neurotoxicidad describe los cambios neurológicos ocasionados por la
exposición a agentes tóxicos, lo que puede resultar en cambios cognitivos, desórdenes
de la memoria, cambios de humor o hasta el comienzo de perturbaciones psiquiátricas.
Entre los agentes tóxicos más comunes tenemos a: los metales pesados, órgano
fosfatos, neurotoxinas animales y de bacterias
El propósito de este estudio fue evaluar los efectos neurotóxicos del plomo y
manganeso, individualmente mediante la viabilidad en células de neuroblastoma de
rata, línea celular B-35, además de determinar si existe sinergismo entre ambos metales
y corroborar el daño celular, mediante la medición de la actividad de la enzima Lactato
Deshidrogenasa (LDH).
Para determinar la citotoxicidad, se utilizó la enzima Lactato deshidrogenasa
(LDH), enzima citosólica, presente en diversas células, como las neuronas, por lo
tanto, al existir un daño en la membrana plasmática se libera LDH en el cultivo celular,
lo que resulta en la formación de formazán, que es directamente proporcional a la
citoxicidad.
En el presente trabajo de investigación, todos los ensayos se realizaron por triplicado
Para la prueba de viabilidad, las células B-35 se cultivaron en el medio DMEM
en placas de 96 pocillos, que reposaron en la incubadora a 37⁰C y condiciones de 5%
CO2 durante 3 días para su óptimo crecimiento; luego se trataron con concentraciones
de 100μM, 75μM, 50μM, 25μM, 10μM, 5μM, 2.5μM, y 1μM de Pb(NO3)2 (Nitrato de
Plomo). En otras placas, se replicó el mismo procedimiento, con la diferencia que a
éstas células se les aplicó Mn(NO3)2 (Nitrato de Manganeso) a concentraciones
100μM, 75μM, 50μM, 25μM, 10μM, 5μM, 2.5μM, y 1μM.
Posteriormente, se llevaron las células a la incubadora, para mantenerlas a 37⁰C
y 5% CO2, por un periodo de 69 horas, al completar el tiempo, las células fueron
llevadas a una cámara de bioseguridad, en donde, se les adicionó 10μl de MTS, con el
fin de determinar la actividad metabólica celular. Por último se realizaron las
respectivas lecturas, en el lector de microplacas.
Para la determinación de sinergismo, se procedió de la misma manera que en
la prueba de viabilidad, se cultivaron las células B35 en el medio DMEM, luego fueron
llevadas a la incubadora, por 3 días, la diferencia estuvo en el tratamiento, el cual
consistió en la combinación de ambos metales Pb(NO3)2 y Mn(NO3)2, a
concentraciones de 0.5μM, 2μM, 4μM, 6μM, 8μM y 10μM. Luego se adicionó los
10μl de MTS y se realizaron las lecturas correspondientes.
Se determinó que el plomo a las 72 horas, a partir de una concentración de
5μM, mientras que el Mn a partir de una concentración de 10μM disminuyen
significativamente la viabilidad, aumentando el daño celular y en el caso de la
combinación de ambos metales, en sus respectivas concentraciones, se evidenció un
efecto sinérgico positivo, el cual disminuye aún más la viabilidad celular, lo que causa
la reducción del crecimiento de los axones neuronales, probablemente afectando la
señalización y transmisión eléctrica entre neuronas.
Palabras clave:
Toxicidad de Plomo, toxicidad de Manganeso, sinergismo de Plomo, sinergismo de
Manganeso, determinación de citotoxicidad.
Discipline: Farmacia y Bioquímica
Grade or title grantor: Universidad Católica de Santa María.Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas
Grade or title: Químico Farmacéutico
Register date: 13-Aug-2019