Efecto de tres crioprotectores en la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca

Abstract

Evalúa el efecto de tres crioprotectores (Dimetil Sulfóxido (DMSO), Etilenglicol (EG) y Glicerol (GL)) sobre la criopreservación de espermatozoides epididimarios de alpaca, en base a su porcentaje de motilidad e integridad funcional de la membrana espermática. Además, se evaluó la capacidad fecundante de los espermatozoides de los grupos con mejor supervivencia postdescongelación, en base a la tasa de división a las 72 horas post-fecundación de ovocitos de alpaca fecundados in vitro. Se recolectaron testículos de alpacas mayores a 3 años de edad sacrificados en el camal de Pilpichaca (Huancavelica). Cada epidídimo con su respectivo par son diseccionados, y los espermatozoides fueron recuperados con la fracción A (leche descremada, yema de huevo y fructosa). Se realizó una evaluación inicial, y sólo las muestras con espermatozoides con una motilidad ≥50% se incluyeron en el estudio. Se seleccionaron 18 muestras, las que tuvieron una motilidad promedio de 69% y un 48% de espermatozoides con la membrana espermática funcional. La fracción A con los espermatozoides fue refrigerada con una tasa de enfriamiento de 1ºC/5 min hasta alcanzar una temperatura promedio de 5ºC. Luego, se dividió dicha fracción para los tres grupos, y se añadió un volumen igual de la fracción B respectiva (fracción A con los crioprotectores) en tres tiempos a intervalos de 10 minutos para obtener la dilución final, la que se dejó en reposo por 30 minutos a 5ºC. A continuación, se llenaron pajillas de 0,5ml con la dilución final, y fueron expuestas al vapor de nitrógeno líquido para luego ser almacenadas en el tanque. Después de 7 días de almacenamiento, las pajillas fueron descongeladas en agua a 37ºC por 1 minuto, para la evaluación de los espermatozoides. Los porcentajes de motilidad post-descongelación fueron de 31%, 8% y 24%, y los porcentajes de integridad funcional de la membrana espermática fueron de 28%, 17% y 26% para los grupos del DMSO, EG y GL, respectivamente. Para la fecundación in vitro, se co-cultivaron ovocitos de alpacas madurados in vitro con los espermatozoides descongelados de los dos mejores grupos (DMSO y GL). El grupo del DMSO (15 ovocitos) tuvo una tasa de división a las 72 horas postfecundación de 47%, mientras que el grupo del GL (15 ovocitos) obtuvo 27%. Estos resultados sugieren que el Dimetil Sulfóxido (7%, 0.9M) y el Glicerol (7%, 0.9M) son agentes crioprotectores más efectivos en comparación al Etilenglicol (7%, 1.2M) bajo las condiciones del presente estudio.