Efecto del co-cultivo in vitro de las células de la granulosa y ovocitos en la maduración ovocitaria de alpaca (Vicugna pacos)

Abstract

Durante los últimos años, estudios sobre las células de granulosa (CG) procedentes del ovario femenino han demostrado una gran versatilidad y un gran potencial de utilidad a nivel de co-cultivo y como células madre con capacidad de pluripotencia. Por ello, como parte de diversos procedimientos biotecnológicos reproductivos en diferentes especies, las CG han venido ayudando a solucionar problemas reproductivos. Con tal enfoque, se planteó evaluar en alpacas el cultivo in vitro de 2 tipos de CG, las células de granulosa murales (CGM) y células de granulosa del cúmulus (CC), y, además, el efecto de las CG en co-cultivo con el ovocito durante su maduración ovocitaria in vitro. Para ello, esta tesis se desarrolló con muestras de ovarios y testículos de alpaca post beneficio, procedentes del departamento de Huancavelica trasladados al laboratorio a 10 °C. En este trabajo se utilizaron 522 ovarios y 3 epidídimos de alpaca, y el diseño experimental de conformó de 4 etapas: la primera etapa abarcó el aislamiento y purificación de las CGM y CC; la segunda etapa consistió en el cultivo in vitro de las CGM y CC, monitoreándolos por el periodo que dura el cultivo primario (144 h – 168 h); la tercera etapa corresponde al co-cultivo de las CGM o CC (cultivadas en la segunda etapa) con los ovocitos durante el periodo de maduración ovocitaria in vitro, con la evaluación de los ovocitos post maduración in vitro; y finalmente, la cuarta etapa se basó en la producción de embriones a partir de los ovocitos obtenidos de la tercera etapa, ya sea embriones por la técnica de activación química o por Fertilización in vitro (FIV), con el monitoreo de los estadíos durante el desarrollo embrionario. Para el análisis estadístico de los datos obtenidos de maduración ovocitaria y desarrollo embrionario se usó la prueba de Chi-Cuadrado. No se observó una diferencia significativa entre los porcentajes de maduración obtenidos, 18.02% en el grupo control (ovocito que maduraron sin co-cultivo), 18.64% en el tratamiento CGM (ovocitos que maduraron en co-cultivo con las CGM), y 18.75% en el tratamiento CC (ovocitos que maduraron en cocultivo con las CC). Con respecto al desarrollo embrionario se empleó la técnica de activación química y FIV, en esta parte solo se usaron los ovocitos del control y tratamiento CGM previo. Se obtuvo una diferencia significativa a favor de la activación química con un 35.71% de desarrollo embrionario con respecto al FIV que llegó a un 9.26%. Se puede concluir que el efecto del co-cultivo durante la maduración ovocitaria influyó de manera positiva en la calidad de ovocitos maduros, como también en el efecto derivado sobre el desarrollo embrionario independientemente de cada técnica de producción embrionaria usada.