Desarrollo de un sistema de cultivo y medición de las fases iniciales de formación de biopelícula en Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Abstract

Desarrolla un método sencillo de cuantificación en tiempo real de la adherencia y crecimiento de biopelícula Pseudomonas aeruginosa. Se evaluó incubaciones desde 10 minutos hasta 48 horas y en intervalos se midió la absorbancia y fluorescencia retirando previamente la forma planctónica antes de cada lectura e incorporando medio de cultivo estéril. Los datos de las lecturas se compararon con la tinción con cristal violeta realizada al final de cada experimento. El análisis visual de los resultados de tinción fue complementado con el registro fotográfico y la cuantificación de la proporción de píxeles coloreados por encima de un umbral de intensidad. Los resultados nos indican que en un tiempo mínimo de 10 minutos hay suficientes bacterias adheridas que formarán posteriormente una biopelícula madura. Los datos de absorbancia comparados con la tinción no se correlacionan, mientras que los datos de fluorescencia si muestran correlación con la proporción de biopelícula detectada por el análisis de las fotografías post-tinción. Consideramos que la fluorescencia debida a la producción de pioverdina permite medir el crecimiento de la biopelícula en tiempo real. Este método tendría la ventaja de no dañar a las bacterias durante un experimento que puede registrar el crecimiento de biopelícula en forma semi-cuantitativa hasta por 48 horas sin necesidad de ninguna tinción. Consideramos que esta técnica puede ser de utilidad para estudios orientados desentrañar los mecanismos de la formación de biopelículas o a la búsqueda de estrategias para evitar su crecimiento temprano.