Expresión recombinante y purificación de encapsulinas de Thermotoga maritima dotadas de fluorescencia y luminiscencia expresadas en Escherichia coli

Abstract

Objetiviza la expresión y purificación de la nanopartícula proteica encapsulina de 24 nm con proteína fluorescente verde (EGFP) (encapsulinaEGFP) y luciferasa (encapsulinaluciferasa) interiorizadas, la determinación de una señal cuantificable y la evaluación de su uso en NDT. El uso de ensayos no destructivos (NDT) es crucial para identificar y determinar discontinuidades en materiales, con el propósito de realizar mantenimientos preventivos. Las técnicas actuales implican un número elevado de pasos con un gasto excesivo de tiempo por lo que la búsqueda de nuevas técnicas es necesaria. La expresión de ambos complejos fue obtenida mediante expresión recombinante en Escherichia coli BLR (DE3), mientras que la purificación se realizó mediante dos pasos cromatográficos. El correcto ensamblaje de encapsulinaEGFP fue corroborado mediante microscopía electrónica de transmisión. De las dos nanopartículas producidas, encapsulinaEGFP mostró un mayor rendimiento de producción con 34.2 ± 2.42 mg de proteína respecto a 0.5 ± 0.14 mg de encapsulinaLuciferasa por litro de cultivo. Además, la determinación de la señal fluorescente fue más sencilla y rápida que el análisis de la señal luminiscente. Para encapsulinaEGFP se determinó un ratio estequiométrico de 2.064 mol EGFP/ mol nanopartícula. El uso de encapsulinaEGFP como tinte penetrante fue probado en una fisura de 0.6 mm de profundidad, obteniéndose un resultado positivo. Se concluye que encapsulinaEGFP posee características para ser utilizado como agente detector de fisuras.