Caracterización molecular y clonación de la fosfolipasa A2 homóloga de los venenos de Bothrops pictus, Bothrops brazili y Bothrops atrox

Abstract

Las PLA2s homólogas (también conocidas como miotoxinas Lys49 o PLA2s K49) son las principales miotoxinas en los venenos de las serpientes del género Bothrops a pesar de presentar nula o ínfima actividad catalítica. En este trabajo, se identificaron tres nuevos transcritos codificantes de las PLA2s homólogas K49 en venenos de las especies Bothrops pictus (“jergón de la costa”), Bothrops brazili (“jergónshushupe”) y Bothrops atrox (“jergón de la selva”) que habitan en el Perú y se clonaron en células de Escherichia coli. Como primer paso, el RNA total fue aislado de venenos frescos y liofilizados, así como de tejido glandular. El rendimiento del RNA obtenido fue aproximadamente 5.0 ng/mg de veneno y 40.0 ng/mg de glándula. La cantidad y calidad de los transcritos fueron suficientes para la eficiente síntesis y amplificación del cDNA. La secuencia aminoacídica deducida de los transcritos se compone de 121/122 residuos de ~ 14.0 kDa y posee un punto isoeléctrico teórico (pI) de ~ 9.0. Los homólogos de PLA2 identificados en B. pictus, B. brazili y B. atrox se nombraron como pictoxina, brazilixina y batroxina, respectivamente, los cuales fueron clonados en células deE. coli TOP10 dentro del vector pCR2.1-TOPO con una eficiencia de transformación de 2.9 x 109 UFC/µg de DNA plasmídico. En relación con estudios transcriptómicos, la batroxina es una variante poblacional en venenos peruanos de una miotoxina encontrada en venenos brasileños con una única mutación nucleotídica que origina la sustitución D13E. La pictoxina corresponde a la PLA2 básica detectada previamente en el veneno de B. pictus. La brazilixina se diferencia considerablemente de otras miotoxinas encontradas en el veneno de B. brazili; por lo que es propuesta como una nueva proteoforma. Asimismo, las tres miotoxinas presentan mutaciones peculiares a nivel de la región C- terminal, loop de unión a calcio e interfaces proteína-membrana y proteína-proteína. Este es el primer estudio de clonación de las PLA2 básicas del género Bothrops de Perú y constituye el cimiento para dar inicio a las actividades de la tecnología recombinante para una caracterización funcional con miras a su aplicabilidad.