Expresión de las interleucinas 2 y 10 de linfocitos de alpacas (Vicugna pacos) en presencia de antígenos clostridiales in vitro

Abstract

Determina mediante la técnica de RT-PCR tiempo real y cuantificación relativa según el método 2 -ΔΔCt, los niveles relativos de expresión de ARNm de IL-2 e IL-10 en leucocitos circulantes de alpacas en presencia de antígenos clostridiales in vitro, empleándose como control endógeno a GAPDH. Se colectó sangre entera usando la técnica de venopunción de la vena yugular de 5 alpacas hembras y 5 alpacas machos adultos. Las muestras fueron centrifugadas para obtener la fracción leucocitaria en gradiente de Ficoll, colectándose la capa flogística. Se realizó un pool de leucocitos que fueron purificados con cloruro de amonio y luego centrifugados, cuya concentración de células vivas se ajustó a 500 000 células/ml de medio mínimo esencial. Seguidamente, fueron cultivados en placas para cultivo celular de 24 pocillos y enfrentados a suspensiones de Clostridium perfringens a las concentraciones de 400ug/ml, 16ug/ml, 0.8ug/ml y 0.2ug/ml por 1, 12 y 24 horas. Posteriormente, se realizó la RT-qPCR. La cinética de la expresión de IL-2 mostró una tendencia inversamente proporcional a la dosis de antígeno clostridial en los tres tiempos de incubación (p>0.05), a diferencia de IL-10 cuya expresión fue variable, alcanzando el máximo a las 12 horas de incubación (p<0.05) mostrando un patrón similar al de IL-2. La expresión de IL-10 superó hasta en 40 veces lo expresado por el calibrador respecto a IL-2, evidenciándose una marcada respuesta hacia la polarización del subtipo Th2.