Determinación del porcentaje de espermatozoides con activacion de caspasas 3/7 obtenidos de epididimo de alpaca analizados mediante citometría de flujo

Abstract

La activación de las caspasas es un evento clave durante la apoptosis, produciendo alteraciones espermáticas que se traducen en problemas de infertilidad. El presente estudio, tuvo como objetivo, deteriminar el porcentaje de espermatozoides con activación de caspasas-3/7. Para tal efecto, se emplearon 23 testículos/epidídimos obtenidos del Camal Municipal de Huancavelica, los cuales fueron procesados en Lima para la recuperación de los espermatozoides de la cola del epidídimo. Las muestras fueron lavadas por centrifugación en PBS y los pellets fueron reconstituidos con 100μl del reactivo CellEventTM Caspasa 3/7 Green Detection Reagent e incubadas a 37.5 ̊C por 30 minutos; luego de 20 minutos iniciada la incubación, se agregó 0.5μl de Ioduro de Propidio. Las lecturas se realizaron por citometría de flujo. Se obtuvo un promedio de espermatozoides con caspasas 3/7 activas de 36.21%, con una desviación estándar de 11.25%, intervalo de confianza entre 31.34 a 41.08% y un coeficiente de variación de 31.07 %. De forma similar, mediante el test Kolmogorov- Smirnov, se encontró, que el porcenitaje de espermaitozoides de epidídimo, con caspasas 3/7 activadas siguió una distribución normal. Asimismo, se evaluó la correlación entre el porcentaje de actividad de caspasas 3/7 y los parámetros testiculares volumen y peso y los parámetros seminales motilidad y concentración, no siendo significativas. Se concluye que la activación de caspasas 3/7 en espermatozoides de alpaca puede ser evaluada utilizando el fluorocromo CellEventTM Caspasa-3/7 Green Detection Reagent mediante citometría de flujo, encontrando un 30-40% de espermatozoides epididimarios de alpaca apoptóticos, los cuales podrían estar relacionados con una fecundación fallida.