Evaluación in vitro de la respuesta leucocitaria de alpacas (Vicugna pacos) en presencia de antígenos clostridiales

Abstract

Evalúa la expresión de citoquinas proinflamatorias de los leucocitos circulantes de alpaca al enfrentarlos a extracto total del C. perfringens y sus toxinas, usando la técnica RT-PCR tiempo real. Se colectó sangre entera de la vena yugular de 10 animales: 5 alpacas hembras y 5 alpacas machos adultos. Los leucocitos fueron separados utilizando cloruro de amonio para lisar los eritrocitos seguidos de centrifugación. Los leucocitos aislados fueron cultivados a una concentración de 500 000 leucocitos /ml de medio MEM (Minimal Essencial Medium) en placas de cultivo de 12 pocillos y enfrentadas a extracto total de C. perfringens cultivados en caldo thioglicolato a concentraciones de 400µg/ml, 80µg/ml, 16µg/ml, 0.8µg/ml y 0.2µg/ml, para luego cuantificar la expresión de las citocinas TNFα, IL-1α, IL1β e IL-6 mediante la RT- PCR. Los resultados obtenidos demostraron que dosis bajas de extractos clostridiales (0.2 a 0.8 µg) son capaces de inducir expresiones de TNFα, IL-1α e IL1β desde las 12 a 24 horas de incubación, a diferencia de dosis altas en donde no sobrepasan la expresión de las citoquinas en leucocitos no estimulados (control). No se evidencia producción considerable de IL-6 hasta las 24 horas post exposición a extracto completo de C. perfringens. Estos resultados indican que el C. perfringens y sus toxinas a dosis bajas inducen la activación de los leucocitos circulatorios de alpacas produciendo la secreción de citoquinas proinflamatorias.