Análisis y purificación de las enzimas proteolíticas presentes en el veneno de Loxosceles laeta “Araña del rincón”

Abstract

Loxosceles laeta, conocida como “araña del rincón” o “araña casera”, es el principal artrópodo de importancia clínica en nuestro país debido a las graves alteraciones fisiológicas, con secuelas irreversibles que produce su mordedura en humanos pudiendo llevar a la muerte. El objetivo de este trabajo fue explorar y caracterizar parcialmente las enzimas proteolíticas presentes en este veneno; las enzimas evaluadas fueron proteolíticas sobre caseína y dimetilcaseína (DMC), así como la acción pro-coagulante sobre plasma humano citratado. El veneno fue fraccionado usando una columna cromatográfica de filtración molecular sobre Sephadex G-100, equilibrado con buffer acetato de amonio 0,05M pH 5,0. Mediante PAGE-SDS se determinó que la proteasa que hidroliza DMC es de naturaleza monomérica, con un peso aproximado de 35 kDa. En los ensayos de inhibición, con el agente quelante EDTA y el inhibidor de serinoproteasas (PMSF), se obtiene una inhibición de 60,4% de la actividad proteolítica usando 5 mM de EDTA y empleando 5 mM de PMSF la actividad pro-coagulante se redujo al 6,7%. Las pruebas de inmunodifusión doble, usando el antiveneno loxoscélico comercial (INS-Perú) mostraron la antigenicidad de las proteasas en estudio, así como del antiveneno total. Se concluye que el veneno de la araña L. laeta contiene por lo menos 2 tipos de proteasas, una del tipo metaloproteasa y la otra serinoproteasa, siendo ambas enzimas reconocidas por el antiveneno loxoscélico comercial.